Temporizzazione del test HIV di 4a generazione. Decifrare i risultati dell'analisi per l'hiv, AIDS recentemente aggiornato! Test ELISA per l'HIV: tempi del test
Nella maggior parte dei paesi del mondo, il test della popolazione per l'HIV si basa sulla rilevazione degli anticorpi contro il virus. Esistono molti metodi per rilevare questi anticorpi, ma il test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) è il più comunemente usato. Nikolai Nedzelsky, redattore capo del portale AIDS.ru, ha analizzato le caratteristiche di diverse generazioni di test ELISA.
Chiunque cerchi di scoprire se ha l'HIV riceve una risposta univoca da fonti sia nazionali che estere - per questo è necessario sottoporsi al test per la presenza di anticorpi contro il virus. Ma non appena una persona inizia ad approfondire le informazioni sui test in modo più dettagliato, inizia a confondersi, poiché diversi specialisti iniziano a fare riferimento a varie fonti, si contraddicono a vicenda. Ciò porta alla sensazione che gli specialisti stessi capiscano poco della diagnosi di infezione da HIV. Come potete immaginare, non è proprio così: nei quasi tre decenni di diagnosi dell'HIV, sono stati fatti grandi progressi attraverso lo sviluppo e l'introduzione di nuove tecnologie. Nel corso degli anni sono state create quattro generazioni di sistemi di test, che si sono sostituiti a vicenda. I progressi nella diagnostica hanno permesso di semplificare il processo di test ad ogni generazione, di automatizzarlo, riducendo così al minimo il "fattore umano", e anche di aumentare l'affidabilità del risultato in una data precedente. Sfortunatamente, le raccomandazioni nazionali sui test, così come le conoscenze dei medici generici e degli specialisti del prelievo di sangue, spesso sono in ritardo rispetto ai progressi e si basano su dati obsoleti. Proprio questo è il motivo principale della confusione nelle opinioni dei medici professionisti che esprimono durante l'esame dei pazienti, o nelle loro pubblicazioni.In questo materiale cercherò di sistematizzare tutti i dati sui test ELISA in modo che tutti possano punti tutte le "i" per se stesse". In alcuni paesi, ad esempio Russia e Regno Unito, l'accesso su larga scala ai test della popolazione che utilizza kit di test di quarta generazione è fornito a livello nazionale e in questi paesi solo in strutture frequenti, e quindi molto raramente, durante i test per l'HIV, si possono incontrare sistemi di test più vecchi. Ma in molti paesi del mondo i sistemi di prova di terza generazione sono ancora ampiamente utilizzati, ad esempio negli USA, anche se la situazione cambia ogni anno e sempre più spesso questo tipo di sistemi di prova passa alla storia. Vorrei attirare la vostra attenzione sul fatto che, studiando varie fonti, non sono riuscito a trovare informazioni che contengano informazioni sull'uso dei sistemi di test di prima e seconda generazione nel nostro tempo. Indipendentemente da ciò, ho deciso di raccontarvi tutti questi sistemi di test, sia moderni che quelli che sono già diventati storia.
Prove che sono diventate storia
I sistemi di test della prima, seconda e terza generazione determinano solo la presenza di anticorpi contro l'HIV. La maggior parte di questi test funziona mediante test immunoenzimatico (ELISA). Considerando che il test ELISA non determina il virus stesso, ma gli anticorpi contro di esso, questo approccio è chiamato "test indiretto". Molti paesi hanno già abbandonato l'uso di sistemi di test che rilevano solo la presenza di anticorpi e sono passati a sistemi di test di quarta generazione [vedi sotto, - ca. AIDS.ru], anch'essi basati sull'ELISA, ma allo stesso tempo, oltre agli anticorpi, possono rilevare la presenza dell'antigene p24 Nel 1985, appena un paio d'anni dopo la scoperta del virus dell'immunodeficienza umana, il sono stati sviluppati i primi sistemi di test ELISA. Usano un virus lisato o sonicato per rilevare gli anticorpi, motivo per cui sono chiamati lisati. Questi sistemi di test hanno permesso per la prima volta di diagnosticare l'infezione da HIV, segnando una pietra miliare nella storia della lotta contro l'AIDS. La particolarità dei sistemi di prova della prima generazione non era elevata
sensibilità e specificità , e ha anche permesso di determinare solo la presenza di anticorpi solo per HIV 1. La seconda generazione di sistemi di test è in grado di rilevare anticorpi sia per HIV1 che per HIV2, poiché sono ricombinanti e/o peptidici. Nel primo caso vengono utilizzati analoghi proteici geneticamente modificati di alcuni antigeni proteici del virus, nel secondo caso vengono utilizzati frammenti proteici sintetizzati chimicamente. Questa generazione di test è diventata disponibile alla fine degli anni '80 del secolo scorso.I sistemi di test di terza generazione sono altamente sensibili, poiché si basano sul principio dell'interazione specifica tra un antigene e il suo anticorpo corrispondente. Una caratteristica di questi tipi di test è la capacità di rilevare gli anticorpi IgM e IgG, che hanno ridotto significativamente il "periodo finestra".Il "periodo finestra" di queste varietà di sistemi di test
Diversi ricercatori forniscono dati abbastanza diversi sulla durata del "periodo finestra", cioè sui tempi in cui i sistemi di test di terza generazione sono in grado di rilevare la presenza del virus nel sangue dopo il momento della trasmissione del virus:- Da tre (21 giorni) a sei settimane (42 giorni) [Studio - Stato dell'arte per la diagnosi dell'infezione da HIV. Autore - Branson BM, 2007. Pubblicato - Clin Infect Dis 45:S221-225].
- Da due a otto settimane (in media 25 giorni), con il 97% delle persone che sviluppa anticorpi entro tre mesi [Non disponibile per lo studio].
- Dopo 20-25 giorni [Studio - Diagnosi clinica di laboratorio dell'HIV-1 e uso dell'RNA virale per monitorare l'infezione. Di Coombs RW, 2008. Pubblicato da In Holmes KK (editore), Malattie sessualmente trasmesse. New York: McGraw-Hill].
- Dopo 22 giorni [Ricerca - Diagnosi di infezione da virus dell'immunodeficienza umana. Autore - Maldarelli F, 2004. Pubblicato - In Principi e pratica delle malattie infettive di Mandell, Douglas e Bennett (sesta edizione). Philadelphia: Elsevier Churchill Livingstone].
- Un mese dopo [Studio - Verso una diagnosi dell'HIV senza errori: linee guida sulla pratica di laboratorio. Autore - Parry JV e altri, 2003. Pubblicato - Comm Dis Pub Health 6:334-350].
Test moderni (sistemi di test di quarta generazione)
I sistemi di test di quarta generazione hanno iniziato ad essere utilizzati alla fine degli anni '90. Questi sistemi di test si basano anche sul metodo ELISA, e in effetti si tratta degli stessi sistemi di test di terza generazione, ma hanno una caratteristica: la capacità di rilevare l'antigene p24. Questi test sono spesso indicati come test combinati e hanno sempre "Ag/Ab" nel nome, a indicare la capacità del test di rilevare sia l'antigene che gli anticorpi. Inoltre, alcuni sistemi di test di quarta generazione sono in grado di rilevare l'HIV-2 e ceppi rari di HIV-1, come il sottotipo O. La determinazione dell'antigene p24 consente di determinare la presenza dell'HIV anche prima della produzione di anticorpi, che riduce il "periodo finestra" e consente di rilevare il virus negli stadi acuti dell'infezione da HIV. Allo stesso tempo, con un risultato positivo, non tutti i test mostrano cosa è stato rilevato esattamente: anticorpi o antigene, quindi, sebbene i sistemi di test siano in grado di rilevare l'HIV nella fase iniziale, è impossibile determinare quanto tempo fa è stato trasmesso il virus con il loro aiuto Di norma, per i sistemi di test della quarta generazione, il sangue viene utilizzato come materiale di test, sebbene in alcuni tipi di test possa essere utilizzata la saliva. Sebbene la saliva sia talvolta utilizzata come materiale negli Stati Uniti, questo approccio di test non è ufficialmente raccomandato in un'indagine sulla popolazione [Studio - Algoritmi alternativi per la diagnosi di infezione da virus dell'immunodeficienza umana utilizzando test autorizzati negli Stati Uniti. Di Owen SM et al., 2008. Pubblicato da J Clin Microbiol 46:1588-1595].
Il "periodo finestra" di questo tipo di sistemi di test
Il rilevamento dell'antigene riduce il "periodo finestra" di circa cinque giorni rispetto ai sistemi di test di terza generazione. Diverse istituzioni scientifiche forniscono stime leggermente diverse della durata del "periodo finestra" tra la penetrazione del virus nel corpo e la capacità dei sistemi di test di quarta generazione di determinarlo:- Da 11 a 16 giorni [Studio - Diagnosi clinica di laboratorio dell'HIV-1 e uso dell'RNA virale per monitorare l'infezione. Autore - Coombs RW, 2008. Pubblicato - Malattie sessualmente trasmissibili. New York: McGraw-Hill].
- Dopo 14 giorni [Studio - Valutazione della sensibilità e specificità di sei test HIV combinati antigene p24 e anticorpi. Di Ly TD et al., 2004. Pubblicato - J Virol Methods 122:185-94].
- Dopo 16 giorni [Ricerca - Diagnosi di infezione da virus dell'immunodeficienza umana. Autore - Maldarelli F, 2004. Pubblicato - In Principi e pratica delle malattie infettive di Mandell, Douglas e Bennett (sesta edizione). Philadelphia: Elsevier Churchill Livingstone].
- Circa due settimane e mezzo [Studio - Stato dell'arte per la diagnosi dell'infezione da HIV. Autore - Branson BM, 2007. Pubblicato - Clin Infect Dis 45:S221-225].
- Da tre a quattro settimane dopo la trasmissione del virus [Studio - Verso una diagnosi dell'HIV senza errori: linee guida sulla pratica di laboratorio. Autore - Parry JV e altri, 2003. Pubblicato - Comm Dis Pub Health 6:334-350].
- Tra 24 e 26 giorni dopo la trasmissione del virus [Studio - Depistage de l "infection par le VIH en France: Modalites de realizzazione des test de depistage, argumentaire. Autore - Haute Autorite de sante, 2008. Pubblicato - www.has-sante .fr].
- Un mese dopo [Studio - Linee guida nazionali del Regno Unito per il test dell'HIV. Autore - BHIVA e BIS, 2008. Pubblicato - Disponibile online su www.bhiva.org].
Risultati falsi
I risultati falsi negativi sono generalmente possibili solo quando il test viene eseguito poco dopo la trasmissione del virus e talvolta quando il test non è sufficientemente sensibile ai rari ceppi di HIV. Gli studi condotti dai produttori di sistemi di test affermano che esiste una probabilità trascurabile di risultati falsi positivi. Questo non ha nulla a che fare con chi viene testato, ma dipende dai farmaci che assumono e dalle vaccinazioni che hanno ricevuto. [Ricerca - Diagnosi di infezione da virus dell'immunodeficienza umana. Autore - Maldarelli F, 2004. Pubblicato - In Principi e Pratica delle Malattie Infettive di Mandell, Douglas e Bennett (sesta edizione). Philadelphia: Elsevier Churchill Livingstone]. Una caratteristica del sistema di test di quarta generazione è che in casi molto rari il il test può dare un risultato falso negativo. Ciò è dovuto al livello dell'antigene p24, che inizia a diminuire circa un mese dopo la trasmissione del virus e durante questo periodo di tempo vengono solitamente rilevati anticorpi. In casi molto rari, il p24 l'antigene potrebbe non essere rilevato fino al momento in cui gli autotest dell'antigene p24 sono più sensibili dei test combinati, quindi è più probabile che siano in grado di rilevare l'infezione da HIV durante questo periodo di tempo [Studio - Test combinato che rileva entrambi i virus dell'immunodeficienza umana (HIV) L'antigene p24 e gli anticorpi anti-HIV aprono una seconda finestra diagnostica di Speers D et al., 2005. Pubblicato - J Clin Microbiol 43:5397-5399; Ricerca - I nuovi test combinati per l'antigene p24 e l'anticorpo dell'HIV potrebbero sostituire i test specifici per l'antigene p24? Autore - Ly TD e altri, 2007. Pubblicato - J Virol Methods 143:86-94; Studio - Valutazione della sensibilità e della specificità di sei saggi combinati dell'antigene p24 dell'HIV e dell'anticorpo. Autore - Ly TD e altri, 2004. Pubblicato - J Virol Methods 122:185-94].Precisione dei sistemi di prova in questa categoria
Uno studio del Regno Unito su dieci kit di test di quarta generazione ha rilevato che tutti tranne uno erano sensibili al 100%. In altre parole, tra tutti gli intervistati, sono stati identificati tutti i casi di infezione da HIV. In uno studio, il sistema di test (combinazione Abbott Murex HIV Ag/Ab) non è riuscito a rilevare un caso di infezione da HIV (su 508 test). Il test non è stato in grado di rilevare l'HIV2. In questo studio, la sensibilità del sistema di test è stata determinata essere del 99,8%. Tutti i sistemi di test studiati nel Regno Unito hanno mostrato una specificità del 99,7% o superiore. In altre parole, se si esaminassero 1000 persone che non hanno l'infezione da HIV, allora 997 test mostrerebbero il risultato corretto e solo in tre casi il risultato sarebbe falso positivo. Che questo risultato fosse falso è stato determinato da un test di conferma. [Ricerca - Miglioramento delle prestazioni dei kit di screening dell'HIV. Autore - Perry KR et al., 2008. Pubblicato - Transfus Med 18:228-240].un campione (su 669 test) ed è risultato avere una sensibilità del 99,8%. I sistemi di test Vidas Duo ed Enzygnost HIV Integral non sono stati in grado di rilevare l'HIV1, sottotipo F e C. In Francia, hanno confrontato la specificità dei sistemi di test di quarta generazione utilizzati alla fine del secolo scorso e quelli prodotti oggi. Se i test precedentemente rilasciati hanno mostrato una specificità dal 99,4% al 99,6%, i test utilizzati ora hanno mostrato una specificità dal 99,8% al 100%. [Studio - Il nuovo test dell'antigene p24 combinato con l'anticorpo dell'HIV potrebbe sostituire i test specifici dell'antigene p24? Autore - Ly TD e altri, 2007. Pubblicato - J Virol Methods 143:86-94 Secondo l'OMS, cinque sistemi di test hanno mostrato che ciascuno di essi aveva una sensibilità del 100%, ma la valutazione della specificità era diversa. Il sistema di test Genscreen Plus HIV Ag/Ab ha mostrato - 98,3% di specificità, Vironostika HIV Uni-Form II Ag/Ab - 99,0%, Abbott Murex HIV Ag/Ab Combination - 99,3%, Genedia HIV Ag-Ab - 99,7%, Enzygnost HIV Integral II era specifico al 100% [Studio - Saggi HIV: caratteristiche operative, rapporto 15. Autore - Dipartimento delle tecnologie sanitarie essenziali dell'Organizzazione mondiale della sanità, 2004. Pubblicato - OMS].Portale AIDS.ru
L'infezione da virus dell'immunodeficienza umana è una diagnosi seria. Errori nella diagnosi possono portare a conseguenze disastrose. L'analisi ELISA per l'HIV è il metodo di ricerca più accessibile, ma non è informativo in tutti i casi.
ELISA - test immunoenzimatico. Il compito del metodo ELISA è di rilevare gli anticorpi contro il virus dell'immunodeficienza nel materiale biologico. Utilizzando il metodo è possibile risalire alla presenza nel liquido non dei virus stessi, ma solo degli anticorpi prodotti in risposta alla loro presenza. L'ELISA è ampiamente utilizzato nella diagnosi delle malattie sessualmente trasmissibili. Aiuta a identificare le malattie sessualmente trasmissibili.
Esistono diversi tipi di ELISA: variante diretta, variante indiretta, metodo sandwich. In ogni caso, la tecnica si basa sulla determinazione della presenza di anticorpi, che fungono da indicatore della penetrazione di un agente estraneo. Per rivelare questi "segni", la componente biologica viene trattata con enzimi.
ELISA rileva gli anticorpi con una precisione del 96 - 98%, l'errore è trascurabile. È del 2 - 4%.
ELISA - un metodo per diagnosticare l'HIV
L'analisi ELISA per l'HIV è la prima fase della diagnosi. Gli antigeni del virus dell'immunodeficienza sono le proteine p24, p15, p17, p31 e le glicoproteine gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.
Per rilevare una proteina virale, una porzione di sangue viene prelevata da una vena. Un campione inviato per l'analisi del sangue ELISA viene trattato con reagenti immunoenzimatici. Il siero è isolato dal sangue. Se durante lo studio vengono trovati, il virus è già presente nel sangue.
Il sangue viene somministrato rigorosamente a stomaco vuoto. 2 giorni prima dell'analisi, non è consigliabile mangiare cibi grassi e bere alcolici. Dovresti interrompere l'assunzione di farmaci antivirali entro 14 giorni.
Vantaggi del metodo:
- costo relativamente basso;
- elevata stabilità dei reagenti;
- alta sensibilità;
- tempi di consegna brevi;
- minima influenza del fattore umano.
I moderni sistemi di test per ELISA sono prodotti secondo gli standard mondiali. Ciò migliora la precisione del metodo.
L'ELISA non fornisce sempre risultati affidabili. Dopo che il virus è entrato nel sangue, inizia lo stadio di sviluppo latente (nascosto). Il periodo fino a quando i virus non hanno iniziato a moltiplicarsi e gli anticorpi non si sono ancora formati è chiamato "tempo finestra sieronegativo". È inutile fare ELISA in questa fase. Se si è verificata un'infezione, il risultato sarà . La velocità con cui il virus si rileva dipende da quante cellule pericolose sono entrate nel corpo. Con rapporti non protetti o trasfusioni di sangue infetto, questo periodo sarà minimo.
Per un'elevata affidabilità dell'ELISA per l'HIV, lo studio viene eseguito tre volte. Scadenze per ELISA per il virus dell'immunodeficienza umana:
- 6 settimane dopo il probabile contatto,
- tra 3 mesi,
- sei mesi dopo.
L'ELISA di 4a generazione per l'HIV è il metodo più informativo nelle prime fasi dell'infezione. Può essere effettuato già 1 mese dopo la presunta infezione. Il test è costoso rispetto alla controparte di terza generazione. Pertanto, nelle istituzioni mediche pubbliche, viene utilizzato come metodo diagnostico aggiuntivo. Viene effettuato gratuitamente il test 3. Se non è possibile fornire una risposta univoca in base ai risultati, il paziente viene inviato per il test ELISA di 4a generazione.
Importante! Immediatamente dopo l'infezione, una persona diventa contagiosa. È pericoloso per gli altri, anche quando non sa ancora della sua diagnosi!
Se durante l'ELISA vengono rilevati anticorpi contro gli antigeni dell'HIV, sono necessari ulteriori studi. Appartiene a questi. L'affidabilità di questo metodo è dell'80%. Con l'aiuto della PCR, vengono esaminati sangue, sperma e perdite vaginali. Il fluido biologico viene suddiviso in un reattore medico, quindi sottoposto a trattamento enzimatico. Di conseguenza, si ottengono dati sulla concentrazione di cellule HIV in un mezzo liquido. A causa del grande errore (20%), con un risultato positivo, viene eseguito anche l'immunoblotting.
Il prossimo passo diagnostico è il test Combo (o immunoblotting). Questo è uno studio altamente sensibile (confidenza al 98%) e dovrebbe essere eseguito se i risultati ELISA non sono conclusivi a 6 mesi.
Interpretazione dei risultati ELISA
Il tempo di decrittazione è compreso tra 24 e 48 ore. Se è necessario ottenere informazioni urgenti (è necessario un intervento chirurgico), la decodifica viene eseguita in 2 ore. Le stazioni mediche provinciali non sempre dispongono dei reagenti necessari. Il campione viene prelevato nel luogo di circolazione, quindi trasferito al centro regionale. In tali circostanze, il risultato può essere scoperto in 1-2 settimane.
Il risultato di un test immunoenzimatico può essere positivo o negativo; Non ci sono altre opzioni.
Anche se il risultato è stato positivo durante il test ELISA primario e ripetuto, il paziente non può essere riconosciuto come infetto da HIV. Possibile errore. Motivi per un risultato falso positivo:
- malattie croniche;
- malattie infettive prolungate;
- gravidanza.
Pertanto, il risultato dell'analisi dovrebbe essere chiarito da ulteriori studi.
Se durante l'immunoblotting per l'HIV (reattivo), una persona è considerata infetta da HIV, il che significa che è sana.
Le cellule del virus alla fine si adattano ai farmaci prescritti. Per il controllo, il test ELISA viene ripetuto periodicamente.
A volte l'immunoblotting mostra un risultato falso negativo. Virus dell'immunodeficienza estremamente raro 6 mesi (o più). Ciò è possibile se una piccola quantità di cellule virali è entrata nel flusso sanguigno. Nello 0,5% del numero totale dei casi, l'infezione può essere diagnosticata solo dopo un anno. Nel 99,5%, entro sei mesi dall'infezione, un ELISA darà un risultato affidabile.
Anche con studi ad alta precisione, c'è ancora un margine di errore del 2%. Non dobbiamo dimenticare il fattore umano. Per eliminare la possibilità di errore, il test può essere effettuato in 2 diverse istituzioni.
Lo studio di campioni di sangue mediante ELISA per l'infezione da HIV è uno dei primi e più affidabili metodi diagnostici. Il test immunoenzimatico è uno dei pochi studi insieme alla PCR che, con un alto grado di probabilità, confermano o confutano una diagnosi così terribile come l'infezione da HIV o l'AIDS. Dalla scoperta dei primi casi di infezione da virus dell'immunodeficienza in Unione Sovietica, ed è il 1983. Non è stato inventato un farmaco che curerebbe completamente questa infezione, così come un vaccino, ma questo processo è in fase di sviluppo attivo. Nel frattempo, solo la diagnosi precoce dell'infezione da HIV consente di tenere sotto controllo il processo patologico.
Escursione informativa sull'infezione da HIV
Il virus dell'immunodeficienza umana è un retrovirus che causa un decorso lento della malattia. Penetrando nel corpo, il virus dell'immunodeficienza colpisce principalmente il tessuto linfoide. L'immunità sana produce linfociti T per riconoscere l'agente virale appena arrivato. Quindi dare informazioni agli anticorpi, da quali segni riconoscere il virus dell'immunodeficienza e distruggerlo. Il processo di "riconoscimento" del virus dell'immunodeficienza avviene con l'aiuto delle proteine del recettore CD4. Ma è proprio in questa fase che si osserva qualcosa di strano, qualcosa che da molti anni non ci permette di sconfiggere la peste del 20° secolo.
La cellula immunitaria CD4 entra in contatto con il virus dell'immunodeficienza per riconoscere un agente estraneo. In questo momento, il virus dell'immunodeficienza si attacca alla membrana linfocitaria, si fonde con il guscio del recettore e introduce nella cellula immunitaria una capsula con le sue informazioni genetiche e proteine virali specifiche. E la cellula, inviata al calcolo del virus dell'immunodeficienza, d'ora in poi si infetta. Ma tutto accade, purtroppo, non con una cella, ma su larga scala. Il sistema immunitario umano, in risposta a cellule già "precedenti" e ora infette, crea nuovi anticorpi. Ma i virus dell'immunodeficienza, secondo lo schema descritto in precedenza, catturano ancora e ancora le cellule del difensore.
Pertanto, l'immunità umana cade in un circolo vizioso. L'unico modo per aiutare l'organismo è eseguire un'infezione antiretrovirale altamente attiva (HAART). E passa anche a uno stile di vita e un'alimentazione completamente sani, che libereranno grandi risorse immunitarie dal lavoro non necessario. Scienziati di tutto il mondo hanno unito le forze e conducono costantemente ricerche alla ricerca di una cura efficace per l'infezione da HIV.
Non molto tempo fa è stato condotto un esperimento con la proteina CCR5, che fornisce l'immunità innata dell'organismo di una certa parte delle persone all'infezione da HIV. Gli scienziati hanno sottoposto la sostanza ematica di volontari umani a terapia genica per introdurre CCR5 nelle cellule T-helper. In tutti i pazienti, ciò ha portato a una massiccia diminuzione del numero di DNA retrovirale. E in un paziente, il virus dell'immunodeficienza è stato completamente eliminato con questo metodo. Sulla base di questo esperimento, si può ancora ipotizzare in un solo caso una vittoria riuscita sulla terribile peste del XX secolo.
Dal 2016, questa attività è andata avanti in modo significativo. Sono stati ottenuti risultati sbalorditivi della distruzione del novanta per cento del virus dell'immunodeficienza con l'aiuto di anticorpi secreti dal tessuto muscolare, bypassando l'immunità catturata. Per fare ciò, un gene speciale è stato impiantato nel tessuto muscolare di creature viventi sperimentali, producendo queste stesse cellule killer per distruggere l'infezione da HIV. Ma questo metodo non è stato ancora utilizzato negli esseri umani, sebbene sia pianificato nei prossimi anni.
Inoltre, non ha senso perdersi d'animo. Ed è meglio identificare il virus dell'immunodeficienza il prima possibile, cosa che può essere fatta con l'aiuto dell'ELISA se c'è il rischio di infezione. E se la diagnosi è confermata, mantieni la tua immunità attraverso HAART fino a quando una nuova cura per l'infezione da HIV non sarà resa pubblica.
Diagnosi di infezione da HIV
Il metodo ELISA per l'infezione da HIV mira a rilevare gli anticorpi contro il virus dell'immunodeficienza in un campione di sangue umano. Una volta nel corpo, i retrovirus, che includono l'infezione da HIV, non iniziano immediatamente a catturare attivamente le cellule immunitarie CD4 (linfociti T). Ma non dovresti aspettare che gli agenti aggressivi inizino un'attività mortale nel corpo. Non è un segreto che per qualsiasi malattia, e l'infezione da HIV non fa eccezione, prima viene iniziata la terapia, più efficace è il trattamento.
Quando si tratta del virus dell'immunodeficienza umana, i casi di guarigione completa non sono stati ufficialmente registrati. Ma questo non significa affatto che devi arrenderti e lasciare che la malattia faccia il suo corso. Le persone con infezione da HIV vivono fino a 75-80 anni, a condizione che vengano rilevate nella fase iniziale e siano sotto costante terapia di mantenimento.
Il metodo del test immunoenzimatico per la diagnosi dell'infezione da HIV ha un'elevata affidabilità di circa il 97-99%. Ma è questa piccola parte dell'1-3% che può dare un risultato falso positivo o falso negativo nella diagnosi di infezione da HIV utilizzando ELISA. A tal fine, al fine di confermare o confutare definitivamente le indicazioni dell'immunodosaggio enzimatico, viene utilizzata un'analisi denominata immunoblot (IB).
Quali sono i metodi ELISA e IB per l'infezione da HIV
Il test immunoenzimatico per l'infezione da HIV di 4a generazione mira non solo alla ricerca e all'identificazione delle cellule patogene, ma anche alla determinazione del loro numero. Pertanto, un test immunoenzimatico combina test qualitativi e quantitativi. Il metodo ELISA di 4a generazione per l'infezione da HIV per un periodo di sei settimane dal momento della presunta infezione mostrerà un'elevata affidabilità dei risultati del 100%.
Il test immunoenzimatico si basa sull'interazione di anticorpi specifici e antigeni correlati. Grazie ad uno speciale enzima si forma la combinazione “antigene-anticorpo”. Per effettuare questa reazione per la rilevazione delle immunoglobuline all'infezione da HIV, un campione di sangue viene posto in un pannello di polistirene con 96 pozzetti, in cui le proteine ricombinanti sono in forma solida (assorbite). Gli antigeni o gli anticorpi trovati nel contenitore con il siero del sangue riconoscono l'oggetto a loro noto e formano con esso il composto “AT-AG”. Per stabilire gli anticorpi contro i virus dell'immunodeficienza di tipo 1 e 2, viene utilizzato anche il test DS IFF per l'HIV AG-AT.
Vantaggi del metodo ELISA per l'infezione da HIV di 4a generazione:
- Alta affidabilità, oltre il 96%. I risultati falsi sono più spesso causati non dall'analisi stessa, ma da una preparazione impropria o da una recente malattia respiratoria.
- Determinazione sia della presenza che dell'abbondanza di immunoglobuline.
- La capacità di tracciare il risultato della terapia per l'HIV.
- La velocità per ottenere i risultati di un test HIV, che è di diverse ore, se effettuato in un centro diagnostico.
- L'analisi per l'infezione da HIV quattro, la cui reattività immunoenzimatica è significativamente più alta rispetto ai suoi predecessori, è informativa durante la finestra sierologica del virus dell'immunodeficienza.
L'immunoblotting è uno screening e viene somministrato per determinare il tipo di antigene. Lo studio di screening IB viene utilizzato come test di verifica per l'infezione da HIV 5-7 settimane dopo l'ELISA. Il metodo IB si basa sull'uso dell'elettroforesi per la separazione degli antigeni dei virus dell'immunodeficienza. Il processo di separazione degli antigeni consente di rilevare immunoglobuline specifiche per ogni antigene specifico dell'infezione da HIV.
L'immunoblotting viene utilizzato quando un test immunoenzimatico per l'infezione da HIV mostra un risultato falso positivo o falso negativo due volte di seguito. Il sospetto può sorgere in assenza o, al contrario, in presenza di sintomi caratteristici dell'infezione da HIV. Anche se anche qui possono esserci varie varianti.
Interpretazione dei risultati ELISA per l'infezione da HIV
Nel caso in cui ELISA plus sia confermato dallo screening IB come positivo, non c'è dubbio che il paziente abbia un virus dell'immunodeficienza nell'organismo. Ma se, ad esempio, l'IFF è positivo per l'HIV e l'immunoblot è negativo, allora concludono che l'infezione è "meno", cioè che è assente.
Solo in una situazione del genere, il paziente viene comunque inviato per un ulteriore esame al fine di escludere sicuramente il virus dell'immunodeficienza.
E con un test di immunoassorbimento enzimatico per l'HIV di 4a generazione "meno" e un immunoblotting positivo, è possibile che nel corpo sia presente un'altra infezione. È possibile che una persona abbia qualche tipo di malattia autoimmune, un processo oncologico, a volte la psoriasi della pelle o delle articolazioni dia risultati falsi positivi sia per ELISA che per IB.
Un'altra opzione, quando un test immunoenzimatico per l'infezione da HIV mostra un risultato "meno" e un immunoblot anche con un valore "meno", qui si può solo rallegrarsi per l'assenza del virus dell'immunodeficienza. Ma se ci sono segni specifici inerenti all'infezione da HIV o se una persona è in stretto contatto con un paziente sieropositivo. Quindi sarà anche necessario condurre ulteriori diagnostiche, ad esempio una reazione a catena della polimerasi (PCR). Inoltre, con dubbi indicatori "meno" o "più", si raccomanda al paziente di ripetere il prelievo di sangue dopo 4 e preferibilmente 6 mesi.
La norma e la deviazione del numero di linfociti T nell'infezione da HIV:
- La norma dei linfociti T va da 1000 a 2900 µl.
- AIDS precoce da 500 a 200 µl.
- L'AIDS ritarda meno di 200 µl.
La malattia è più facile da prevenire che da curare: questa è tutta una saggezza ben nota. Dalla diffusione della morale libera nella società, è apparso un gran numero di varie malattie veneree. Le infezioni da HIV e l'AIDS sono ancora classificate come malattie incurabili. Il metodo di trasmissione è principalmente sessuale e attraverso il sangue. È impossibile proteggere il cento per cento da una singola malattia. Ci sono molte situazioni impreviste, anche per persone che conducono uno stile di vita morale e pulito. In una situazione di aumentato rischio di contrarre l'HIV e altre infezioni pericolose, la diagnostica del sangue ha un valore inestimabile.
In contatto con
Nella maggior parte dei pazienti, gli anticorpi contro l'HIV vengono rilevati 6-12 settimane dopo l'infezione utilizzando sistemi di test di prima generazione e 3-4 settimane utilizzando sistemi di test di terza generazione che funzionano secondo il principio dell'ELISA sandwich con due antigeni. Tuttavia, l'infezione da HIV viene rilevata già 2 settimane dopo l'infezione dall'analisi dell'antigene p24 e dopo 1 settimana dall'analisi dell'RNA virale. In altre parole, il periodo finestra può essere ridotto a 2 settimane o più con un approccio diagnostico completo. L'antigene del capside p24 appare nel sangue durante la rapida replicazione virale nella fase febbrile acuta dell'infezione da HIV e viene facilmente rilevato durante questo periodo utilizzando un ELISA semplice e relativamente economico.
Se il compito è identificare tutte le persone con infezione da HIV, comprese quelle con le prime fasi dell'infezione, è necessario utilizzare l'intero arsenale di test: per gli anticorpi, per gli antigeni e per l'RNA. Tuttavia, i test per l'RNA virale sono costosi, laboriosi e fuori dalla portata della maggior parte dei laboratori. Eppure quei laboratori che dispongono di apparecchiature ELISA sono in grado di rilevare la maggior parte dei casi di infezione da HIV, a condizione che i campioni siano testati sia per gli anticorpi HIV che per l'antigene p24.
Alla fine degli anni '90 c'erano sistemi di test per ELISA parallelo per gli anticorpi contro l'HIV e l'antigene p24, che eliminavano la necessità di test separati. È stata sviluppata ed è in fase di implementazione una nuova generazione di sistemi di test combinati per il rilevamento simultaneo di anticorpi contro l'HIV e gli antigeni dell'HIV.
Il vantaggio delle analisi combinate è che richiedono meno tempo, meno manodopera e sono più convenienti rispetto alle analisi separate. I sistemi di test combinati hanno un'elevata sensibilità analitica sia per l'uso di un ELISA sandwich con due antigeni per rilevare gli anticorpi contro l'HIV, sia per il rilevamento simultaneo dell'antigene p24.
Attualmente, ci sono 8 sistemi di test combinati di quarta generazione sul mercato che hanno superato i test clinici: VIDAS HIV DUO Ultra (bioMérieux; Marcy-l'Etoile, Francia); Enzymun-Test-HIV-Combi (Boehringer; Mannheim, Germania); Vironostika HIV Uni-Form II Ag/AB (Organon Teknika; Boxtel, Paesi Bassi); AxSYM-HIV Ag/AB (Abbott Laboratories; Abbott Park, IL, USA); Enzygnost HIV Integral (Dade Behring; Marburg, Germania); Genescreen Plus HIV Ag-AB (Bio-Rad) e COBAS Core HIV Combi (Roche Diagnostics; Mannheim, Germania); Elecsys-HIV Combi (Boehringer; Mannheim, Germania). L'ultimo sistema di test utilizzava il metodo sandwich elettrochemiluminescente con due antigeni; l'analisi dura 18 minuti; la specificità secondo i test sui pazienti ospedalizzati è del 99,8%. Questo sistema di test consente di diagnosticare l'infezione da HIV 5 giorni prima rispetto ai sistemi di test più sensibili per gli anticorpi contro l'HIV. Esiste un altro anticorpo combinato senza marchio e p24 ELISA con solo il 99,5% di sensibilità e il 94,8% di specificità.
Il test combinato di anticorpi e antigeni per l'infezione da HIV recente ea lungo termine è giustificato non solo nei test sui donatori di sangue, ma anche in molti contesti clinici. La diagnosi precoce dell'infezione da HIV rilevando l'antigene p24 consente un trattamento immediato, la consulenza al paziente e misure per ridurre il rischio di trasmissione. Grazie alla capacità di rilevare l'antigene p24, i sistemi di test di quarta generazione consentono di diagnosticare l'infezione da HIV in una fase precoce. Questi kit di test sono molto utili per diagnosticare l'infezione da HIV recente ea lungo termine in ospedali e laboratori clinici indipendenti e centri diagnostici (sia pubblici che commerciali). I pazienti spesso si rivolgono a tali istituzioni, il rischio di infezione da HIV in cui è significativamente più alto rispetto ai donatori di sangue. Per la diagnosi precoce dell'infezione da HIV in tali pazienti, sono necessari sistemi di test con elevata sensibilità analitica.
È importante notare che l'elevata sensibilità analitica ed epidemiologica della maggior parte dei sistemi di test di quarta generazione, dimostrata in test su pazienti di diverse popolazioni, pazienti con sieroconversione e pazienti con diversi sottotipi di HIV, rende questi sistemi di test indispensabili per la diagnosi sia di recenti e infezione da HIV a lungo termine in una varietà di contesti. Ad esempio, nei laboratori clinici delle istituzioni sanitarie di bilancio, il test del sangue per gli antigeni dell'HIV di solito non viene eseguito (questa è prerogativa delle stazioni di trasfusione di sangue) e quindi i casi di infezione recente possono non essere rilevati nei test standard per gli anticorpi contro l'HIV . È stato dimostrato che il rilevamento dell'infezione in una fase precoce fornisce una base per l'inizio tempestivo della terapia antiretrovirale, che ne aumenta l'efficacia. Inoltre, diventa possibile consultare il paziente in modo tempestivo, organizzare correttamente la sua gestione e prevenire la trasmissione dell'infezione da HIV.
Test rapidi: Questa è una classe di sistemi di test che forniscono risultati in meno di 30 minuti. I test rapidi per l'individuazione di anticorpi specifici contro l'HIV sono apparsi alla fine degli anni '80 e all'inizio degli anni '90. guadagnato popolarità. Grazie al miglioramento della tecnologia di produzione, i test rapidi sono diventati non meno accurati dell'ELISA (a condizione che l'analisi sia eseguita con attenzione, da un dipendente qualificato). Tuttavia, a causa della semplicità immaginaria dei test rapidi, il personale spesso commette errori. Ad esempio, quando si aggiungono i reagenti, le pipette non vengono sempre tenute verticalmente (come indicato nelle istruzioni), il che viola il rapporto tra i volumi dei reagenti. Un'altra fonte di errore è la tendenza di molti tecnici ad analizzare più campioni contemporaneamente. Per questo motivo, il tempo delle fasi di analisi non viene mantenuto.
Se eseguiti correttamente, i test rapidi per gli anticorpi HIV forniscono risultati affidabili e possono essere utilizzati in un'ampia varietà di contesti sanitari e situazioni cliniche. In particolare, trovano impiego in pronto soccorso, studi medici, ambulatori, ambulatori, ambulatori, obitori, centri trasfusionali e ovunque sia richiesto un test HIV urgente (ad esempio dopo il contatto di un operatore sanitario con una possibile fonte di infezione) .
I test rapidi dell'HIV sono indispensabili per testare le donne in travaglio che non hanno ricevuto cure prenatali (cioè le donne in travaglio con stato HIV indeterminato). È stato dimostrato che la terapia antiretrovirale (in particolare la zidovudina) riduce efficacemente il rischio di trasmissione verticale dell'HIV e che tale trattamento è necessario il prima possibile per la madre e quindi per il neonato. Il test rapido di una donna incinta per l'HIV nel periodo prenatale consente, se vengono rilevati anticorpi, di iniziare il trattamento prima del parto.
Descrizione
Addestramento
Indicazioni
Interpretazione dei risultati
Descrizione
Metodo di determinazione Saggio immunoenzimatico (ELISA).
Materiale in fase di studio Siero
Disponibile visita a domicilio
Rilevazione combinata di anticorpi contro l'HIV di tipo 1 e 2 e l'antigene p24 dell'HIV, un test qualitativo.
Attenzione. In caso di reazioni positive e dubbiose, il termine per l'emissione del risultato può essere prorogato fino a 10 giorni lavorativi. L'HIV (virus dell'immunodeficienza umana), che causa l'AIDS (sindrome da immunodeficienza acquisita), appartiene alla famiglia dei retrovirus. Si trasmette da persona a persona attraverso l'uso di aghi e siringhe contaminati per uso endovenoso di farmaci o procedure terapeutiche, attraverso i rapporti sessuali, sia eterosessuali che omosessuali. La trasmissione del virus può avvenire attraverso la trasfusione di sangue infetto e dei suoi prodotti, la donazione di organi o liquido seminale, negli operatori sanitari - se feriti da aghi o strumenti infetti. L'infezione da HIV è possibile attraverso la sua trasmissione da una madre infetta a un bambino (via verticale), sebbene i moderni metodi di prevenzione che utilizzano la terapia antiretrovirale, se vengono seguite tutte le raccomandazioni, possono ridurre al minimo questo rischio.
Il processo di interazione di un virus con una cellula comprende una serie di fasi: legame del virus con la cellula, il suo rilascio dal guscio, la penetrazione nel citoplasma, la sintesi del DNA dall'RNA virale e l'integrazione del DNA virale nel genoma di la cellula ospite. Successivamente, inizia la fase latente dell'infezione. In questo stato, il DNA provirale può esistere per qualche tempo senza mostrare attività e senza influenzare l'attività vitale della cellula ospite. Finché non c'è espressione di proteine virali, non c'è risposta immunitaria al virus. Gli anticorpi contro l'HIV, che caratterizzano la risposta immunitaria dell'organismo, compaiono dopo l'attivazione del DNA virale e l'inizio della riproduzione attiva del virus. La durata del periodo di latenza dipende da una serie di fattori, comprese le caratteristiche genetiche individuali dell'organismo.
Gli anticorpi contro l'HIV possono comparire a partire dalla seconda settimana dopo l'infezione; il loro contenuto aumenta entro 2-4 settimane e persiste per molti anni. Nel 90-95% degli infetti compaiono nei primi tre mesi dopo l'infezione, nel 5-9% - nel periodo da tre a sei mesi, nello 0,5-1% - in un secondo momento.
Nelle prime settimane di infezione, anche prima della comparsa degli anticorpi contro il virus (cioè prima della sieroconversione), la presenza di antigeni dell'HIV, inclusa la sua proteina capside p24, può essere rilevata in campioni di siero o plasma. Successivamente, dopo la sieroconversione, di solito diventa non rilevabile.
I saggi combinati di quarta generazione, come il test HIV Ag/Ab Combo (Architect, Abbott), rilevano sia gli anticorpi dell'HIV di tipo 1 e 2 che l'antigene p24 dell'HIV, consentendo la diagnosi precoce dell'infezione. Le caratteristiche peculiari del test di screening utilizzato nel laboratorio INVITRO per rilevare l'infezione da HIV includono l'elevata specificità dello studio (> 99,5%); 100% di sensibilità del test agli anticorpi caratteristici del periodo di sieroconversione e la sensibilità del test all'antigene p24 è di circa 18 pg/ml.
La procedura per i test di laboratorio per l'HIV è rigorosamente regolata dagli ordini del Ministero della Salute della Federazione Russa e comprende la fase di uno studio di screening (screening) della presenza di anticorpi contro l'HIV mediante metodi di dosaggio immunoenzimatico (ELISA) approvati per l'uso , e la fase di uno studio di verifica (conferma) più approfondito nel laboratorio del centro cittadino AIDS. Va notato che anche i migliori sistemi ELISA di screening non garantiscono il 100% di specificità, ovvero esiste qualche possibilità di ottenere risultati non specifici e falsi positivi associati alle caratteristiche del siero del sangue del paziente. Pertanto, un risultato ELISA di screening positivo potrebbe non essere confermato nei test di conferma, dopodiché al paziente verrà fornito un risultato negativo o indeterminato. Se il risultato dello studio di conferma è indeterminato, il test deve essere ripetuto in dinamica in 2-3 settimane.
La diagnosi di laboratorio dell'infezione da HIV nei bambini nati da madri con infezione da HIV ha le sue caratteristiche. Gli anticorpi materni contro l'HIV (classe IgG) possono circolare nel sangue fino a 18 mesi dal momento della nascita. L'assenza di anticorpi contro l'HIV nei neonati non significa che il virus non abbia attraversato la barriera placentare. I bambini di madri con infezione da HIV sono soggetti a esame diagnostico di laboratorio entro 36 mesi dalla nascita.
Addestramento
Non è richiesta una preparazione speciale. Il prelievo di sangue è raccomandato non prima di 4 ore dopo l'ultimo pasto. Si possono trovare raccomandazioni generali per la preparazione alla ricerca. Si consiglia di effettuare un test per la rilevazione dell'antigene e degli anticorpi contro l'HIV non prima di due settimane dopo una possibile infezione, ripetendolo dopo tre e sei settimane in caso di risultato negativo. La registrazione delle domande di ricerca presso INVITRO LLC viene effettuata sulla base di un passaporto o di un documento che lo sostituisce (carta di migrazione, registrazione temporanea nel luogo di residenza, certificato del militare, certificato dell'ufficio passaporti in caso di smarrimento del passaporto, carta di registrazione dall'hotel). Il documento presentato deve contenere informazioni sulla registrazione temporanea o permanente nel territorio della Federazione Russa e una fotografia. In assenza di passaporto (documento sostitutivo), il paziente ha il diritto di presentare domanda anonima per la consegna del biomateriale. Con un esame anonimo, alla domanda e al campione di biomateriale ricevuto dal cliente viene assegnato un numero noto solo al paziente e al personale medico che ha effettuato l'ordine. ! I risultati degli studi svolti in forma anonima non possono essere sottoposti a ricovero, esami professionali e non sono soggetti a registrazione presso l'ORUIB.
Indicazioni per appuntamento
- Ingrossamento dei linfonodi in più di due aree.
- Leucopenia con linfopenia.
- Sudorazioni notturne.
- Perdita di peso improvvisa di causa sconosciuta.
- Diarrea per più di tre settimane di causa sconosciuta.
- Febbre di causa sconosciuta.
- Pianificazione per la gravidanza.
- Preparazione preoperatoria, ricovero.
- Identificazione delle seguenti infezioni o loro combinazioni: tubercolosi, toxoplasmosi manifesta, infezione da herpesvirus spesso ricorrente, candidosi degli organi interni, nevralgia ripetuta da herpes-zoster, polmonite causata da micoplasmi, pneumocisti o legionella.
- Sarcoma di Kaposi in giovane età.
- Sesso occasionale.
Interpretazione dei risultati
L'interpretazione dei risultati del test contiene informazioni per il medico curante e non costituisce una diagnosi. Le informazioni in questa sezione non devono essere utilizzate per l'autodiagnosi o l'autotrattamento. Una diagnosi accurata viene effettuata dal medico, utilizzando sia i risultati di questo esame che le informazioni necessarie da altre fonti: anamnesi, risultati di altri esami, ecc.
Unità di misura nel Laboratorio Indipendente INVITRO: test qualitativo. La forma di presentazione dei risultati: in assenza di anticorpi contro l'antigene HIV 1 e 2 e p24, la risposta è “negativa”. In caso di rilevamento di anticorpi contro l'HIV o antigene nel test ELISA di screening, il campione di siero viene inviato per l'analisi mediante un metodo di immunoblot di conferma al centro cittadino per l'AIDS, che verifica i risultati positivi e indeterminati.
Risultato positivo:
- infezione da HIV;
- risultato falso positivo che richiede studi ripetuti o aggiuntivi*);
- lo studio non è informativo nei bambini di età inferiore a 18 mesi nati da madri con infezione da HIV.
*La specificità del sistema di test di screening per gli anticorpi HIV 1 e 2 e l'antigene HIV 1 e 2 (HIV Ag/Ab Combo, Abbott) è stimata dal produttore del reagente in circa il 99,6% sia nella popolazione generale che nel gruppo di pazienti con potenziali interferenze (infezioni HBV, HCV, Rosolia, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E.coli, Chl.trach., ecc., patologie autoimmuni (tra cui artrite reumatoide, presenza di anticorpi antinucleari), gravidanza, elevati livelli di IgG, IgM, gammopatia monoclonale, emodialisi, trasfusioni multiple di sangue).