Timpul de testare HIV a patra generație. Descifrând rezultatele analizei pentru HIV, SIDA actualizat recent! Testul ELISA pentru HIV: momentul testării
În majoritatea țărilor lumii, testarea populației pentru HIV se bazează pe detectarea anticorpilor împotriva virusului. Există multe metode de detectare a acestor anticorpi, dar testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) este cel mai frecvent utilizat. Nikolai Nedzelsky, redactor-șef al portalului AIDS.ru, a analizat caracteristicile diferitelor generații de teste ELISA.
Orice persoană care încearcă să afle dacă are HIV primește un răspuns cert atât din surse naționale, cât și din străinătate - pentru aceasta este necesar să fie testată pentru prezența anticorpilor împotriva virusului. Dar de îndată ce o persoană începe să se scufunde în informațiile despre testare mai detaliat, începe să se încurce în ea, deoarece diferiți specialiști încep să se refere la diverse surse, se contrazic reciproc. Acest lucru duce la sentimentul că specialiștii înșiși înțeleg puțin despre diagnosticul infecției cu HIV. După cum vă puteți imagina, nu este chiar așa, în cele aproape trei decenii de diagnosticare a HIV, s-au făcut progrese mari prin dezvoltarea și introducerea de noi tehnologii. De-a lungul anilor, au fost create patru generații de sisteme de testare, care s-au înlocuit reciproc. Progresul în diagnosticare a făcut posibilă simplificarea procesului de testare cu fiecare generație, automatizarea acestuia, minimizând astfel „factorul uman” și, de asemenea, creșterea fiabilității rezultatului la o dată mai devreme. Din păcate, liniile directoare naționale de testare, precum și cunoștințele medicilor generaliști și specialiștilor în prelevarea de sânge, rămân adesea în urmă progresului și se bazează pe date învechite. Acesta este tocmai motivul principal al confuziei în opiniile profesioniștilor medicali pe care le exprimă în timpul examinării pacienților, sau în publicațiile lor.În acest material, voi încerca să sistematizez toate datele privind testarea prin ELISA, astfel încât toată lumea să poată dot tot „eu” pentru ei înșiși”. În unele țări, de exemplu, Rusia și Marea Britanie, accesul pe scară largă la testarea populației folosind kituri de testare de generația a patra este oferit la nivel național, iar în aceste țări numai în unități frecvente și apoi foarte rar, atunci când se testează pentru HIV, se pot întâlni sisteme de testare mai vechi. Dar în multe țări ale lumii, sistemele de testare din a treia generație sunt încă utilizate pe scară largă, de exemplu, în SUA, deși situația se schimbă în fiecare an și din ce în ce mai des acest tip de sisteme de testare intră în istorie. Aș dori să vă atrag atenția asupra faptului că, atunci când studiez diverse surse, nu am putut găsi informații care să conțină informații despre utilizarea sistemelor de testare de prima și a doua generație în timpul nostru. Indiferent de asta, m-am hotarat sa va povestesc despre toate aceste sisteme de testare, atat moderne, cat si cele care au devenit deja istorie.
Teste care au devenit istorie
Sistemele de testare din prima, a doua și a treia generație determină doar prezența anticorpilor împotriva HIV. Cele mai multe dintre aceste teste funcționează prin imunotest enzimatic (ELISA). Având în vedere că testarea ELISA nu determină virusul în sine, ci anticorpii la acesta, această abordare se numește „testare indirectă”. Multe țări au abandonat deja utilizarea sistemelor de testare care detectează doar prezența anticorpilor și au trecut la sistemele de testare de a patra generație [vezi mai jos, - Aprox. AIDS.ru], care se bazează și pe ELISA, dar în același timp, pe lângă anticorpi, pot detecta prezența antigenului p24. În 1985, la doar câțiva ani după ce a fost descoperit virusul imunodeficienței umane, au fost dezvoltate primele sisteme de testare ELISA. Ei folosesc un virus lizat sau sonicat pentru a detecta anticorpii, motiv pentru care se numesc lizate. Aceste sisteme de testare au făcut posibilă pentru prima dată diagnosticarea infecției cu HIV, marcând o piatră de hotar în istoria luptei împotriva SIDA. Particularitatea sistemelor de testare din prima generație nu a fost ridicată
sensibilitate și specificitate , și de asemenea a făcut posibilă determinarea numai a prezenței anticorpilor numai la HIV 1. A doua generație de sisteme de testare sunt capabile să detecteze anticorpi atât la HIV1 cât și la HIV2, deoarece sunt recombinanți și/sau peptidici. În primul caz, sunt utilizați analogi proteici modificați genetic ai anumitor antigeni proteici ai virusului, în al doilea caz se folosesc fragmente de proteine sintetizate chimic. Această generație de teste a devenit disponibilă la sfârșitul anilor 80 ai secolului trecut.Sistemele de testare din a treia generație sunt foarte sensibile, deoarece se bazează pe principiul interacțiunii specifice între un antigen și anticorpul corespunzător acestuia. O caracteristică a acestor tipuri de teste este capacitatea de a detecta anticorpi IgM și IgG, ceea ce a redus semnificativ „perioada fereastră”.„Perioada fereastră” a acestor varietăți de sisteme de testare
Diferiți cercetători oferă date destul de diferite despre durata „perioadei ferestre”, adică despre momentul în care sistemele de testare din a treia generație sunt capabile să detecteze prezența virusului în sânge după momentul transmiterii virusului:- Trei (21 de zile) până la șase săptămâni (42 de zile) [Studiu - Stadiul tehnicii pentru diagnosticarea infecției cu HIV. Autor - Branson BM, 2007. Publicat - Clin Infect Dis 45:S221-225].
- Două până la opt săptămâni (în medie 25 de zile), cu 97% dintre oameni care dezvoltă anticorpi în decurs de trei luni [Nu este disponibil în studiu].
- După 20-25 de zile [Studiu - Diagnosticul clinic de laborator al HIV-1 și utilizarea ARN viral pentru monitorizarea infecției. De Coombs RW, 2008. Publicat de In Holmes KK (editor), Sexually Transmitted Diseases. New York: McGraw-Hill].
- După 22 de zile [Cercetare - Diagnosticarea infecției cu virusul imunodeficienței umane. Autor - Maldarelli F, 2004. Publicat - În Mandell, Douglas and Bennett "s Principles and Practice of Infectious Diseases (ediția a șasea). Philadelphia: Elsevier Churchill Livingstone].
- O lună mai târziu [Studiu - Către un diagnostic HIV fără erori: linii directoare privind practica de laborator. Autor - Parry JV și alții, 2003. Publicat - Comm Dis Pub Health 6:334-350].
Teste moderne (sisteme de testare din a patra generație)
Sistemele de testare din a patra generație au început să fie utilizate la sfârșitul anilor 1990. Aceste sisteme de testare se bazează, de asemenea, pe metoda ELISA și, de fapt, acestea sunt aceleași sisteme de testare de a treia generație, dar au o caracteristică - capacitatea de a detecta antigenul p24. Aceste teste sunt adesea denumite teste combinate și au întotdeauna „Ag/Ab” în numele lor, indicând capacitatea testului de a detecta atât antigenul, cât și anticorpii. De asemenea, unele sisteme de testare din a patra generație sunt capabile să detecteze HIV-2 și tulpini rare de HIV-1, cum ar fi subtipul O. Determinarea antigenului p24 vă permite să determinați prezența HIV chiar înainte de producerea de anticorpi, ceea ce reduce „perioada fereastră” și face posibilă depistarea virusului în stadiile acute ale infecției cu HIV. În același timp, cu un rezultat pozitiv, nu toate testele arată ce anume a fost detectat - anticorpi sau antigen, prin urmare, deși sistemele de testare sunt capabile să detecteze HIV în stadiul inițial, este imposibil să se determine cu cât timp în urmă a fost transmis virusul. cu ajutorul lor.De regulă, pentru sistemele de testare din a patra generație, sângele este folosit ca material de testare, deși saliva poate fi folosită în unele tipuri de teste. Deși saliva este uneori folosită ca material în SUA, această abordare de testare nu este recomandată oficial într-un studiu populațional [Study - Alternative Algorithms for Human Immunodeficiency Virus Infection Diagnosis Using Tests That Are Licensed in the United States. De Owen SM et al., 2008. Publicat de J Clin Microbiol 46:1588-1595].
„Perioada fereastră” a acestui tip de sisteme de testare
Detectarea antigenului reduce „perioada fereastră” cu aproximativ cinci zile în comparație cu sistemele de testare din a treia generație. Diferitele instituții științifice oferă estimări ușor diferite ale duratei „perioadei ferestre” dintre pătrunderea virusului în organism și capacitatea sistemelor de testare din a patra generație de a determina acest lucru:- 11 până la 16 zile [Studiu - Diagnosticul clinic de laborator al HIV-1 și utilizarea ARN viral pentru monitorizarea infecției. Autor - Coombs RW, 2008. Publicat - Boli cu transmitere sexuală. New York: McGraw-Hill].
- După 14 zile [Studiu - Evaluarea sensibilității și specificității a șase teste HIV combinate antigen p24 și anticorpi. De Ly TD și colab., 2004. Publicat - J Virol Methods 122:185-94].
- După 16 zile [Cercetare - Diagnosticarea infecției cu virusul imunodeficienței umane. Autor - Maldarelli F, 2004. Publicat - În Mandell, Douglas and Bennett "s Principles and Practice of Infectious Diseases (ediția a șasea). Philadelphia: Elsevier Churchill Livingstone].
- Aproximativ două săptămâni și jumătate [Studiu - Stadiul tehnicii pentru diagnosticarea infecției cu HIV. Autor - Branson BM, 2007. Publicat - Clin Infect Dis 45:S221-225].
- Trei până la patru săptămâni după transmiterea virusului [Studiu - Către un diagnostic HIV fără erori: linii directoare privind practica de laborator. Autor - Parry JV și alții, 2003. Publicat - Comm Dis Pub Health 6:334-350].
- Între 24 și 26 de zile după transmiterea virusului [Study - Depistage de l "infection par le VIH en France: Modalites de realization des tests de depistage, argumentaire. Autor - Haute Autorite de sante, 2008. Publicat - www.has-sante .fr ].
- O lună mai târziu [Studiu - Ghid național britanic pentru testarea HIV. Autor - BHIVA și BIS, 2008. Publicat - Disponibil online la www.bhiva.org].
Rezultate false
Rezultatele fals negative sunt de obicei posibile numai atunci când testarea este efectuată la scurt timp după transmiterea virusului și, uneori, când testul nu este suficient de sensibil la tulpini rare de HIV. Studiile efectuate de producătorii de sisteme de testare spun că există o probabilitate neglijabilă de rezultate fals pozitive. Acest lucru nu are nicio legătură cu cine este testat, dar depinde de medicamentele pe care le iau și de vaccinurile pe care le-au primit. [Cercetare - Diagnosticarea infectiei cu virusul imunodeficientei umane. Autor - Maldarelli F, 2004. Publicat - În Mandell, Douglas and Bennett "s Principles and Practice of Infectious Diseases (ediția a șasea). Philadelphia: Elsevier Churchill Livingstone]. O caracteristică a sistemului de testare de a patra generație este că, în cazuri foarte rare, testul poate da un rezultat fals negativ. Acest lucru se datorează nivelului de antigen p24, care începe să scadă la aproximativ o lună după transmiterea virusului, iar anticorpii sunt de obicei detectați în această perioadă de timp. În cazuri foarte rare, p24 este posibil ca antigenul să nu fie detectat până în momentul în care autotestele cu antigen p24 sunt mai sensibile decât testele combinate, astfel încât este mai probabil ca acestea să poată detecta infecția cu HIV în această perioadă de timp [Studiu - Test combinat care detectează atât virusul imunodeficienței umane (HIV) Antigenul p24 și anticorpii anti-HIV deschide o a doua fereastră de diagnostic de către Speers D și colab., 2005. Publicat - J Clin Microbiol 43:5397-5399; Cercetare - Ar putea noile teste combinate cu antigenul p24 și anticorpii HIV să înlocuiască testele specifice antigenului p24? Autor - Ly TD și alții, 2007. Publicat - J Virol Methods 143:86-94; Studiu - Evaluarea sensibilității și specificității a șase teste combinate de antigen și anticorpi p24 HIV. Autor - Ly TD și alții, 2004. Publicat - J Virol Methods 122:185-94].Precizia sistemelor de testare din această categorie
Un studiu din Marea Britanie pe zece kituri de testare din a patra generație a constatat că toate, cu excepția uneia, au fost 100% sensibile. Cu alte cuvinte, dintre toți cei chestionați au fost identificate toate cazurile de infecție cu HIV. Într-un studiu, sistemul de testare (combinația Abbott Murex HIV Ag/Ab) nu a reușit să detecteze un caz de infecție cu HIV (din 508 teste). Testul nu a putut detecta HIV2. În acest studiu, sensibilitatea sistemului de testare a fost determinată a fi de 99,8%. Toate sistemele de testare studiate în Marea Britanie au arătat o specificitate de 99,7% sau mai mare. Cu alte cuvinte, dacă ar fi examinate 1000 de persoane care nu au infecție cu HIV, atunci 997 de teste ar arăta rezultatul corect și doar în trei cazuri rezultatul ar fi fals pozitiv. Că acest rezultat a fost fals a fost stabilit printr-un test de confirmare. [Cercetare - Îmbunătățirea performanței truselor de screening HIV. Autor - Perry KR et al., 2008. Publicat - Transfus Med 18:228-240].o probă (din 669 de teste) și s-a constatat că are o sensibilitate de 99,8%. Sistemele de testare Vidas Duo și Enzygnost HIV Integral nu au putut detecta HIV1, subtipul F și C. În Franța, specificitatea sistemelor de testare din a patra generație utilizate la sfârșitul secolului trecut și a celor produse acum a fost comparată. Dacă testele lansate anterior au arătat o specificitate de la 99,4% la 99,6%, atunci testele care sunt utilizate acum au arătat o specificitate de la 99,8% la 100%. [Studiu - Ar putea noile teste combinate cu antigenul p24 și anticorpii HIV să înlocuiască testele specifice antigenului p24? Autor - Ly TD și alții, 2007. Publicat - J Virol Methods 143:86-94].Conform OMS, cinci sisteme de testare au arătat că fiecare dintre ele avea o sensibilitate de 100%, dar evaluarea specificității a fost diferită. Sistemul de testare Genscreen Plus HIV Ag/Ab a prezentat - 98,3% specificitate, Vironostika HIV Uni-Form II Ag/Ab - 99,0%, Abbott Murex HIV Ag/Ab Combination - 99,3%, Genedia HIV Ag-Ab - 99,7%, Enzygnost HIV Integral II a fost 100% specific [Studiu - Teste HIV: Caracteristici operaționale, raport 15. Autor - Departamentul Tehnologiilor Esențiale de Sănătate al Organizației Mondiale a Sănătății, 2004. Publicat - OMS].Portalul AIDS.ru
Infecția cu virusul imunodeficienței umane este un diagnostic serios. Greșelile de diagnosticare pot duce la consecințe dezastruoase. Analiza ELISA pentru HIV este cea mai accesibilă metodă de cercetare, dar nu este informativă în toate cazurile.
ELISA - imunotest enzimatic. Sarcina metodei ELISA este de a detecta anticorpi împotriva virusului imunodeficienței în materialul biologic. Folosind metoda, este posibilă urmărirea prezenței în lichid nu a virușilor înșiși, ci doar a anticorpilor produși ca răspuns la prezența acestora. ELISA este utilizat pe scară largă în diagnosticul bolilor cu transmitere sexuală. Ajută la identificarea bolilor cu transmitere sexuală.
Există mai multe tipuri de ELISA: variantă directă, variantă indirectă, metoda sandwich. În orice caz, tehnica se bazează pe determinarea prezenței anticorpilor, care servesc ca indicator al pătrunderii unui agent străin. Pentru a dezvălui aceste „semne”, componenta biologică este tratată cu enzime.
ELISA detectează anticorpii cu o precizie de 96 - 98%, eroarea este neglijabilă. Este de 2 - 4%.
ELISA - o metodă de diagnosticare a HIV
Analiza ELISA pentru HIV este prima etapă a diagnosticului. Antigenele virusului imunodeficienței sunt proteinele p24, p15, p17, p31 și glicoproteinele gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.
Pentru a detecta o proteină virală, o porțiune de sânge este prelevată dintr-o venă. O probă trimisă pentru testarea sângelui ELISA este tratată cu reactivi de imunotest enzimatic. Serul este izolat din sânge. Dacă în timpul studiului sunt găsite, atunci virusul este deja prezent în sânge.
Sângele se administrează strict pe stomacul gol. Cu 2 zile înainte de analiză, nu se recomandă consumul de alimente grase și consumul de alcool. Ar trebui să încetați să luați medicamente antivirale în decurs de 14 zile.
Avantajele metodei:
- cost relativ scăzut;
- stabilitate ridicată a reactivilor;
- sensibilitate crescută;
- timp scurt de livrare;
- influența minimă a factorului uman.
Sistemele moderne de testare pentru ELISA sunt produse conform standardelor mondiale. Acest lucru îmbunătățește acuratețea metodei.
ELISA nu dă întotdeauna rezultate fiabile. După ce virusul intră în sânge, începe stadiul latent (ascuns) de dezvoltare. Perioada până când virușii au început să se înmulțească și anticorpii nu s-au format încă se numește „timp fereastră seronegativă”. Este inutil să faci ELISA în această etapă. Dacă a apărut o infecție, rezultatul va fi . Cât de repede se detectează virusul depinde de câte celule periculoase au intrat în organism. Cu actul sexual neprotejat sau transfuzia de sânge infectat, această perioadă va fi minimă.
Pentru o fiabilitate ridicată a ELISA pentru HIV, studiul este efectuat de trei ori. Termenele limită pentru ELISA pentru virusul imunodeficienței umane:
- 6 săptămâni după contactul probabil,
- in 3 luni,
- șase luni mai târziu.
ELISA de a 4-a generație pentru HIV este metoda cea mai informativă în stadiile incipiente ale infecției. Poate fi efectuat încă de la 1 lună de la presupusa infecție. Testul este scump în comparație cu omologul din a 3-a generație. Prin urmare, în instituțiile medicale publice, este utilizat ca metodă suplimentară de diagnostic. Testul 3 se efectuează gratuit. Dacă este imposibil să se ofere un răspuns fără ambiguitate pe baza rezultatelor sale, pacientul este trimis pentru ELISA de a 4-a generație.
Important! Imediat după infecție, o persoană devine contagioasă. Este periculos pentru alții, chiar și atunci când nu știe încă despre diagnosticul său!
Dacă în timpul ELISA sunt detectați anticorpi la antigenele HIV, sunt necesare studii suplimentare. Aparține acestora. Fiabilitatea acestei metode este de 80%. Cu ajutorul PCR se examinează sângele, materialul seminal și secrețiile vaginale. Fluidul biologic este împărțit într-un reactor medical, apoi este supus unui tratament enzimatic. Ca rezultat, se obțin date privind concentrația celulelor HIV într-un mediu lichid. Datorită erorii mari (20%), cu un rezultat pozitiv, se efectuează suplimentar imun blotting.
Următorul pas de diagnostic este testul Combo (sau blotting imun). Acesta este un studiu extrem de sensibil (98% de încredere) și ar trebui făcut dacă rezultatele ELISA sunt neconcludente la 6 luni.
Interpretarea rezultatelor ELISA
Timpul de decriptare este de la 24 la 48 de ore. Dacă este necesară obținerea de informații urgent (este necesară intervenția chirurgicală), decodarea se realizează în 2 ore. Posturile medicale provinciale nu au întotdeauna reactivii necesari. Proba se prelevează la locul de circulație, apoi este transferată în centrul regional. În astfel de circumstanțe, rezultatul poate fi aflat în 1-2 săptămâni.
Rezultatul unui imunotest enzimatic poate fi fie pozitiv, fie negativ; nu exista alte optiuni.
Chiar dacă rezultatul a fost pozitiv în timpul testului ELISA primar și repetat, pacientul nu poate fi recunoscut ca fiind infectat cu HIV. Posibilă eroare. Motive pentru un rezultat fals pozitiv:
- boli cronice;
- boli infecțioase prelungite;
- sarcina.
Prin urmare, rezultatul analizei ar trebui clarificat prin studii suplimentare.
Dacă în timpul imunoblotting pentru HIV (reactiv), o persoană este considerată infectată cu HIV, ceea ce înseamnă că este sănătoasă.
Celulele virusului se adaptează în cele din urmă la medicamentele prescrise. Pentru control, testul ELISA se repetă periodic.
Uneori, imunoblotting-ul arată un rezultat fals negativ. Virusul imunodeficienței extrem de rar 6 luni (sau mai mult). Acest lucru este posibil dacă o cantitate mică de celule virale a intrat în sânge. În 0,5% din numărul total de cazuri, infecția poate fi diagnosticată numai după un an. În 99,5%, în termen de șase luni de la infecție, un ELISA va da un rezultat fiabil.
Chiar și cu studii de înaltă precizie, există încă o marjă de eroare de 2%. Nu trebuie să uităm de factorul uman. Pentru a elimina posibilitatea de eroare, testul poate fi efectuat în 2 instituții diferite.
Studiul probelor de sânge folosind ELISA pentru infecția cu HIV este una dintre cele mai timpurii și mai fiabile metode de diagnosticare. Imunotestul enzimatic este unul dintre puținele studii alături de PCR care, cu un grad ridicat de probabilitate, confirmă sau infirmă un diagnostic atât de teribil precum infecția HIV sau SIDA. De la descoperirea primelor cazuri de infecție cu virusul imunodeficienței în Uniunea Sovietică, iar acesta este 1983. Un medicament care ar vindeca complet această infecție, precum și un vaccin pentru aceasta, nu a fost inventat, dar acest proces este în curs de dezvoltare activă. Între timp, doar diagnosticarea precoce a infecției cu HIV vă permite să țineți sub control procesul patologic.
Excursie informativă despre infecția cu HIV
Virusul imunodeficienței umane este un retrovirus care provoacă o evoluție lentă a bolii. Pătrunzând în organism, virusul imunodeficienței afectează în primul rând țesutul limfoid. Imunitatea sănătoasă produce limfocite T pentru a recunoaște agentul viral nou sosit. Apoi dați informații anticorpilor, după ce semne să recunoască virusul imunodeficienței și să-l distrugă. Procesul de „recunoaștere” a virusului imunodeficienței are loc cu ajutorul proteinelor receptorilor CD4. Dar tocmai în această etapă se observă ceva ciudat, ceva care de mulți ani nu ne-a permis să învingem ciuma secolului al XX-lea.
Celula imunității CD4 intră în contact cu virusul imunodeficienței pentru a recunoaște un agent străin. În acest moment, virusul imunodeficienței se atașează de membrana limfocitară, se contopește cu învelișul receptorului și introduce o capsulă cu informațiile sale genetice și proteine virale specifice în celula imunitară. Iar celula, trimisă la calculul virusului imunodeficienței, de acum înainte însăși se infectează. Dar totul se întâmplă, din păcate, nu cu o singură celulă, ci la scară foarte mare. Sistemul imunitar uman, ca răspuns la celulele deja „foste” și acum infectate, creează noi anticorpi. Dar virușii imunodeficienței, conform schemei descrise mai devreme, captează din nou și din nou celulele apărătoare.
Astfel, imunitatea umană intră într-un cerc vicios. Singura modalitate de a ajuta organismul este să efectueze o infecție antiretrovială foarte activă (HAART). Și, de asemenea, treceți la un stil de viață și o nutriție complet sănătos, care va elibera resurse mari de imunitate de la munca inutilă. Oamenii de știință din întreaga lume și-au unit forțele și efectuează constant cercetări în căutarea unui remediu eficient pentru infecția cu HIV.
Nu cu mult timp în urmă, a fost efectuat un experiment cu proteina CCR5, care asigură imunitatea înnăscută a organismului unei anumite părți a oamenilor la infecția cu HIV. Oamenii de știință au supus substanța sanguină a voluntarilor umani terapiei genice pentru a introduce CCR5 în celulele T-helper. La toți pacienții, acest lucru a dus la o scădere masivă a numărului de ADN retroviral. Și la un pacient, virusul imunodeficienței a fost eliminat complet prin această metodă. Pe baza acestui experiment, încă se poate presupune doar într-un singur caz despre o victorie reușită asupra teribilă ciumă a secolului al XX-lea.
Din 2016, această activitate a avansat semnificativ. S-au obținut rezultate uluitoare ale distrugerii cu nouăzeci la sută a virusului imunodeficienței cu ajutorul anticorpilor de atac secretați de țesutul muscular, ocolind imunitatea capturată. Pentru a face acest lucru, o genă specială a fost implantată în țesutul muscular al ființelor vii experimentale, producând aceleași celule ucigașe pentru a distruge infecția cu HIV. Dar această metodă nu a fost încă folosită la om, deși este planificată în următorii ani.
Mai mult, nu are sens să-ți pierzi inima. Și este mai bine să identifici cât mai devreme virusul imunodeficienței, ceea ce se poate face cu ajutorul ELISA dacă a existat riscul de infecție. Și dacă diagnosticul este confirmat, menține-ți imunitatea prin HAART până când un nou remediu pentru infecția cu HIV este făcut public.
Diagnosticul infecției cu HIV
Metoda ELISA pentru infecția cu HIV are ca scop detectarea anticorpilor împotriva virusului imunodeficienței într-o probă de sânge uman. Odată ajuns în organism, retrovirusurile, care includ infecția cu HIV, nu încep imediat să captureze în mod activ celulele imune CD4 (limfocitele T). Dar nu ar trebui să așteptați până când agenții agresivi încep o activitate mortală în organism. Nu este un secret că pentru orice boală, iar infecția cu HIV nu face excepție, cu cât terapia este începută mai devreme, cu atât este mai eficient.
Când vine vorba de virusul imunodeficienței umane, cazurile de vindecare completă nu au fost înregistrate oficial. Dar asta nu înseamnă deloc că trebuie să renunți și să lași boala să-și urmeze cursul. Persoanele cu infecție HIV trăiesc până la 75-80 de ani, cu condiția ca acestea să fie depistate în stadiul inițial și să fie sub terapie de întreținere constantă.
Metoda de imunotest enzimatic pentru diagnosticul infecției cu HIV are o fiabilitate ridicată de aproximativ 97–99%. Dar această mică parte de 1–3% poate da un rezultat fals pozitiv sau fals negativ în diagnosticarea infecției cu HIV folosind ELISA. În aceste scopuri, pentru a confirma sau infirma în final indicațiile imunotestului enzimatic, se folosește o analiză numită immunoblot (IB).
Care sunt metodele ELISA și IB pentru infecția cu HIV
Imunotestul enzimatic pentru infecția cu HIV din a 4-a generație vizează nu numai căutarea și identificarea celulelor patogene, ci și determinarea numărului acestora. Prin urmare, un imunotest enzimatic combină atât testarea calitativă, cât și cea cantitativă. Metoda ELISA de a 4-a generație pentru infecția cu HIV pentru o perioadă de șase săptămâni din momentul presupusei infecții va arăta o fiabilitate 100% ridicată a rezultatelor.
Imunotestul enzimatic se bazează pe interacțiunea dintre anticorpi specifici și antigene înrudite. Datorită unei enzime speciale, se formează combinația „antigen-anticorp”. Pentru a efectua această reacție pentru detectarea imunoglobulinelor la infecția cu HIV, o probă de sânge este plasată într-un panou de polistiren cu 96 de godeuri, în care proteinele recombinante sunt în formă solidă (sorbite). Antigenii sau anticorpii găsiți în recipientul cu ser de sânge recunosc obiectul cunoscut de ei și formează compusul „AT-AG” cu acesta. Pentru stabilirea anticorpilor împotriva virusurilor imunodeficienței tipurile 1 și 2, se utilizează și testul DS IFF pentru HIV AG-AT.
Avantajele metodei ELISA pentru infecția cu HIV din a 4-a generație:
- Fiabilitate ridicată, peste 96%. Rezultatele false sunt cauzate cel mai adesea nu de analiza în sine, ci de o pregătire necorespunzătoare sau de o boală respiratorie recentă.
- Determinarea atât a prezenței, cât și a abundenței imunoglobulinelor.
- Capacitatea de a urmări rezultatul terapiei HIV.
- Viteza de obținere a rezultatelor unui test HIV, care este de câteva ore, dacă se efectuează într-un centru de diagnostic.
- O analiză pentru infecția cu HIV patru, a cărei reactivitate la imunotestul enzimatic este semnificativ mai mare decât predecesorii săi, este informativă în timpul ferestrei serologice a virusului imunodeficienței.
Imunoblotting este un screening și se administrează pentru a determina tipul de antigen. Studiul de screening IB este utilizat ca test de verificare pentru infecția cu HIV la 5-7 săptămâni după ELISA. Metoda IB se bazează pe utilizarea electroforezei pentru separarea antigenelor virusurilor imunodeficienței. Procesul de separare a antigenelor face posibilă detectarea imunoglobulinelor specifice pentru fiecare antigen specific al infecției cu HIV.
Imunoblotting este utilizat atunci când un test imunoenzimatic pentru infecția cu HIV arată un rezultat fals pozitiv sau fals negativ de două ori la rând. Suspiciunea poate apărea în absența sau, dimpotrivă, prezența simptomelor caracteristice infecției cu HIV. Deși și aici pot exista diverse variații.
Interpretarea rezultatelor ELISA pentru infecția cu HIV
În cazul în care ELISA plus este confirmat prin screening-ul IB ca pozitiv, nu există nicio îndoială că pacientul are un virus al imunodeficienței în organism. Dar dacă, de exemplu, IFF este pozitiv pentru HIV, iar imunoblotul este negativ, atunci ei ajung la concluzia că infecția este „minus”, adică este absentă.
Doar într-o astfel de situație, pacientul este trimis în continuare pentru o examinare suplimentară pentru a exclude cu siguranță virusul imunodeficienței.
Și cu un test imunosorbent legat de enzime pentru HIV din a 4-a generație „minus” și un imunoblot pozitiv, este posibil ca o altă infecție să fie prezentă în organism. Este posibil ca o persoană să aibă o boală autoimună, un proces oncologic, uneori psoriazisul pielii sau articulațiilor să dea rezultate fals pozitive atât la ELISA, cât și la IB.
O altă opțiune, atunci când testul imunoenzimatic pentru infecția HIV arată un rezultat „minus” și o imunoblot tot cu o valoare „minus”, aici nu se poate decât să se bucure din cauza absenței virusului imunodeficienței. Dar dacă există semne specifice inerente infecției cu HIV sau dacă o persoană este în contact strâns cu un pacient HIV pozitiv. Apoi, va fi, de asemenea, necesar să se efectueze diagnostice suplimentare, de exemplu, o reacție în lanț a polimerazei (PCR). În plus, cu indicatori dubioși „minus” sau „plus”, pacientului i se recomandă reluarea sângelui după 4, și de preferință 6 luni.
Norma și abaterea numărului de limfocite T în infecția cu HIV:
- Norma celulelor T este de la 1000 la 2900 µl.
- SIDA timpuriu 500 până la 200 µl.
- SIDA târziu mai puțin de 200 µl.
Boala este mai ușor de prevenit decât de vindecat - aceasta este înțelepciunea binecunoscută. De la răspândirea moravurilor libere în societate, au apărut un număr mare de diferite boli venerice. Infecțiile cu HIV și SIDA sunt încă clasificate drept boli incurabile. Metoda de transmitere este în principal sexuală și prin sânge. Este imposibil să protejezi sută la sută de o singură boală. Sunt multe situații neprevăzute, chiar și pentru persoanele care duc un stil de viață moral și curat. Într-o situație de risc crescut de a contracta HIV și alte infecții periculoase, diagnosticele de sânge sunt de neprețuit.
In contact cu
La majoritatea pacienților, anticorpii împotriva HIV sunt detectați la 6-12 săptămâni după infectare folosind sisteme de testare de prima generație și la 3-4 săptămâni folosind sisteme de testare de a treia generație care funcționează pe principiul ELISA sandwich cu doi antigeni. Cu toate acestea, infecția cu HIV este detectată încă de la 2 săptămâni după infecție prin analiză pentru antigenul p24 și după 1 săptămână prin analiză pentru ARN viral. Cu alte cuvinte, perioada fereastră poate fi redusă la 2 săptămâni sau mai mult cu o abordare cuprinzătoare de diagnosticare. Antigenul capside p24 apare în sânge în timpul replicării virale rapide în faza febrilă acută a infecției cu HIV și este ușor de detectat în această perioadă folosind un ELISA simplu și relativ ieftin.
Dacă sarcina este de a identifica toate persoanele infectate cu HIV, inclusiv cele cu stadii incipiente de infecție, atunci este necesar să se folosească întregul arsenal de teste: pentru anticorpi, pentru antigeni și pentru ARN. Cu toate acestea, testarea pentru ARN viral este costisitoare, necesită forță de muncă și nu poate fi accesată pentru majoritatea laboratoarelor. Cu toate acestea, acele laboratoare care au echipament ELISA sunt capabile să detecteze majoritatea cazurilor de infecție cu HIV, cu condiția ca probele să fie testate atât pentru anticorpi HIV, cât și pentru antigenul p24.
La sfârșitul anilor 1990 au existat sisteme de testare pentru ELISA paralel pentru anticorpi la HIV și antigenul p24, ceea ce a eliminat necesitatea unor teste separate. O nouă generație de sisteme de testare combinate pentru detectarea simultană a anticorpilor la HIV și antigenele HIV a fost dezvoltată și este în curs de implementare.
Avantajul analizelor combinate este că acestea necesită mai puțin timp, necesită mai puțină forță de muncă și sunt mai rentabile decât analizele separate. Sistemele de testare combinate au o sensibilitate analitică ridicată atât datorită utilizării unui ELISA sandwich cu doi antigeni pentru detectarea anticorpilor la HIV, cât și datorită detectării simultane a antigenului p24.
În prezent, există pe piață 8 sisteme de testare combinate de a patra generație care au trecut cu succes studiile clinice: VIDAS HIV DUO Ultra (bioMérieux; Marcy-l'Etoile, Franța); Enzymun-Test-HIV-Combi (Boehringer; Mannheim, Germania); Vironostika HIV Uni-Form II Ag/AB (Organon Teknika; Boxtel, Olanda); AxSYM-HIV Ag/AB (Abbott Laboratories; Abbott Park, IL, SUA); Enzygnost HIV Integral (Dade Behring; Marburg, Germania); Genescreen Plus HIV Ag-AB (Bio-Rad) și COBAS Core HIV Combi (Roche Diagnostics; Mannheim, Germania); Elecsys-HIV Combi (Boehringer; Mannheim, Germania). Ultimul sistem de testare a folosit metoda sandwich electrochemiluminiscent cu doi antigeni; analiza durează 18 minute; specificitatea conform testelor efectuate pe pacientii internati este de 99,8%. Acest sistem de testare vă permite să diagnosticați infecția cu HIV cu 5 zile mai devreme decât cele mai sensibile sisteme de testare pentru anticorpi la HIV. Există un alt anticorp combinat fără marcă și ELISA p24 cu doar 99,5% sensibilitate și 94,8% specificitate.
Testarea combinată a anticorpilor și antigenului pentru infecția recentă și pe termen lung cu HIV este justificată nu numai în testarea donatorilor de sânge, ci și în multe situații clinice. Diagnosticul precoce al infecției HIV prin detectarea antigenului p24 permite inițierea promptă a tratamentului, consilierea pacientului și măsuri de reducere a riscului de transmitere. Datorită capacității de a detecta antigenul p24, sistemele de testare din a patra generație fac posibilă diagnosticarea infecției cu HIV într-un stadiu incipient. Aceste sisteme de testare sunt foarte utile pentru diagnosticarea infecției HIV recente și pe termen lung în spitale și laboratoare clinice independente și centre de diagnostic (atât publice, cât și comerciale). Pacienții apelează adesea la astfel de instituții, riscul de infectare cu HIV la care este semnificativ mai mare decât la donatorii de sânge. Pentru depistarea precoce a infecției cu HIV la astfel de pacienți, sunt necesare sisteme de testare cu sensibilitate analitică ridicată.
Este important de remarcat faptul că sensibilitatea analitică și epidemiologică ridicată a majorității sistemelor de testare din a patra generație, dovedită în teste pe pacienți din diferite populații, pacienți cu seroconversie și pacienți cu diferite subtipuri HIV, face ca aceste sisteme de testare să fie indispensabile pentru diagnosticarea atât a celor recente. și infecția cu HIV pe termen lung într-o varietate de situații. De exemplu, în laboratoarele clinice ale instituțiilor bugetare de asistență medicală, testarea sângelui pentru antigenele HIV de obicei nu este efectuată (aceasta este apanajul stațiilor de transfuzie de sânge) și, prin urmare, cazurile de infecție recentă pot fi omise în testarea standard pentru anticorpii HIV. . S-a demonstrat că detectarea infecției într-un stadiu incipient oferă o bază pentru inițierea în timp util a terapiei antiretrovirale, ceea ce crește eficacitatea acesteia. În plus, devine posibilă consultarea pacientului în timp util, organizarea corectă a managementului acestuia și prevenirea transmiterii infecției cu HIV.
Teste exprese: Aceasta este o clasă de sisteme de testare care oferă rezultate mai repede de 30 de minute. Testele rapide pentru detectarea anticorpilor specifici la HIV au apărut la sfârșitul anilor 1980 și la începutul anilor 1990. a câștigat popularitate. Datorită îmbunătățirii tehnologiei de producție, testele rapide au devenit nu mai puțin precise decât ELISA (cu condiția ca analiza să fie efectuată cu atenție, de către un angajat calificat). Cu toate acestea, datorită simplității imaginare a testelor expres, personalul greșește adesea. De exemplu, atunci când adăugați reactivi, pipetele nu sunt întotdeauna ținute vertical (așa cum este indicat în instrucțiuni), ceea ce încalcă raportul dintre volumele de reactiv. O altă sursă de eroare este tendința multor tehnicieni de a analiza mai multe probe în același timp. Din această cauză, timpul pașilor de analiză nu este menținut.
Atunci când sunt efectuate corect, testele rapide de anticorpi HIV oferă rezultate fiabile și pot fi utilizate într-o mare varietate de medii medicale și clinice. În special, ele sunt utilizate în secțiile de urgență, cabinetele medicale, ambulatoriile, secțiile de patologie, morgi, punctele de transfuzie de sânge și oriunde este necesară testarea HIV urgentă (de exemplu, după contactul unui lucrător medical cu o posibilă sursă de infecție) .
Testele rapide HIV sunt indispensabile pentru testarea femeilor aflate în travaliu care nu au beneficiat de îngrijiri prenatale (adică femeile aflate în travaliu cu statut HIV nedeterminat). S-a demonstrat că terapia antiretrovială (în special, zidovudină) reduce în mod eficient riscul de transmitere verticală a HIV și că un astfel de tratament este necesar cât mai curând posibil pentru mamă, iar apoi pentru nou-născut. Testarea rapidă a unei femei însărcinate pentru HIV în perioada prenatală permite, dacă sunt detectați anticorpi, să înceapă tratamentul înainte de naștere.
Descriere
Instruire
Indicatii
Interpretarea rezultatelor
Descriere
Metoda de determinare Imunotestul enzimatic (ELISA).
Material în studiu Ser
Vizita la domiciliu disponibila
Detectarea combinată a anticorpilor la HIV tipurile 1 și 2 și a antigenului HIV p24, un test calitativ.
Atenţie. În cazul reacțiilor pozitive și îndoielnice, termenul de eliberare a rezultatului poate fi prelungit până la 10 zile lucrătoare. HIV (virusul imunodeficienței umane), care provoacă SIDA (sindromul imunodeficienței dobândite), aparține familiei retrovirusurilor. Se transmite de la persoană la persoană prin utilizarea de ace și seringi contaminate pentru consumul de droguri intravenoase sau proceduri terapeutice, prin actul sexual, atât heterosexual, cât și homosexual. Transmiterea virusului poate avea loc prin transfuzia de sânge și produse sanguine infectate, donarea de organe sau lichid seminal și la lucrătorii din domeniul sănătății atunci când sunt răniți de ace sau instrumente infectate. Infecția cu HIV este posibilă prin transmiterea ei de la o mamă infectată la copil (cale verticală), deși metodele moderne de prevenire care utilizează terapia antiretrovială, dacă sunt respectate toate recomandările, pot reduce acest risc la minimum.
Procesul de interacțiune a unui virus cu o celulă include o serie de etape: legarea virusului de celulă, eliberarea sa din coajă, pătrunderea în citoplasmă, sinteza ADN din ARN viral și integrarea ADN-ului viral în genom. a celulei gazdă. După aceasta, începe stadiul latent al infecției. În această stare, ADN-ul proviral poate exista o perioadă de timp fără a prezenta activitate și fără a afecta activitatea vitală a celulei gazdă. Atâta timp cât nu există o expresie a proteinelor virale, nu există un răspuns imun la virus. Anticorpii împotriva HIV, care caracterizează răspunsul imun al organismului, apar după activarea ADN-ului viral și începutul reproducerii active a virusului. Durata perioadei latente depinde de o serie de factori, inclusiv de caracteristicile genetice individuale ale organismului.
Anticorpii împotriva HIV pot apărea începând cu a doua săptămână după infectare; conținutul lor crește în 2-4 săptămâni și persistă mulți ani. La 90-95% dintre cei infectați apar în primele trei luni după infectare, la 5-9% - în perioada de la trei până la șase luni, în 0,5-1% - la o dată ulterioară.
În primele săptămâni de infecție, chiar înainte de apariția anticorpilor împotriva virusului (adică înainte de seroconversie), prezența antigenelor HIV, inclusiv a proteinei capsidei p24, poate fi detectată în probele de ser sau plasmă. Mai târziu, după seroconversie, devine de obicei nedetectabil.
Testele combinate de a patra generație, cum ar fi testul HIV Ag/Ab Combo (Arhitect, Abbott), detectează atât anticorpii HIV de tip 1 și tip 2, cât și antigenul HIV p24, permițând detectarea precoce a infecției. Caracteristicile speciale ale testului de screening utilizat în laboratorul INVITRO pentru depistarea infecției cu HIV includ specificitatea ridicată a studiului (> 99,5%); Sensibilitatea testului de 100% la anticorpii caracteristici perioadei de seroconversie, iar sensibilitatea testului la antigenul p24 este de aproximativ 18 pg/ml.
Procedura de testare de laborator pentru HIV este strict reglementată de ordinele Ministerului Sănătății al Federației Ruse și include etapa unui studiu de screening (screening) a prezenței anticorpilor la HIV prin metode imunoenzimatice (ELISA) aprobate pentru utilizare. , și stadiul unui studiu de verificare (confirmare) mai detaliat în laboratorul centrului SIDA al orașului. Trebuie remarcat faptul că nici cele mai bune sisteme ELISA de screening nu garantează o specificitate de 100%, adică există o oarecare posibilitate de a obține rezultate nespecifice, fals pozitive asociate cu caracteristicile serului sanguin al pacientului. Prin urmare, un rezultat ELISA de screening pozitiv poate să nu fie confirmat în testele de confirmare, după care pacientului i se va da un rezultat negativ sau nedeterminat. Dacă rezultatul studiului de confirmare este nedeterminat, testarea trebuie repetată în dinamică în 2-3 săptămâni.
Diagnosticul de laborator al infecției cu HIV la copiii născuți din mame infectate cu HIV are propriile sale caracteristici. Anticorpii materni împotriva HIV (clasa IgG) pot circula în sângele lor până la 18 luni din momentul nașterii. Absența anticorpilor împotriva HIV la nou-născuți nu înseamnă că virusul nu a trecut bariera placentară. Copiii mamelor infectate cu HIV sunt supuși examinării diagnostice de laborator în termen de 36 de luni de la naștere.
Instruire
Nu este necesară o pregătire specială. Se recomandă prelevarea de sânge nu mai devreme de 4 ore după ultima masă. Recomandări generale pentru pregătirea pentru cercetare pot fi găsite. Este recomandabil să se efectueze un test pentru detectarea antigenului și a anticorpilor la HIV nu mai devreme de două săptămâni după o posibilă infecție, repetându-l după trei și șase săptămâni în cazul unui rezultat negativ. Înregistrarea cererilor de cercetare la INVITRO LLC se efectuează pe baza unui pașaport sau a unui document care îl înlocuiește (carte de migrare, înregistrare temporară la locul de reședință, certificat de militar, certificat de la biroul de pașapoarte în caz de pierdere a pașaportului, carte de înregistrare). dintr-un hotel). Documentul prezentat trebuie să conțină informații despre înregistrarea temporară sau permanentă pe teritoriul Federației Ruse și o fotografie. În lipsa unui pașaport (un document care îl înlocuiește), pacientul are dreptul de a face o cerere anonimă pentru livrarea de biomaterial. Cu o examinare anonima, aplicatiei si proba de biomaterial primita de la client i se atribuie un numar cunoscut doar pacientului si personalului medical care a plasat comanda. ! Rezultatele studiilor efectuate anonim nu pot fi depuse pentru internare, examinări profesionale și nu fac obiectul înregistrării la ORUIB.
Indicații pentru programare
- Mărirea ganglionilor limfatici în mai mult de două zone.
- Leucopenie cu limfopenie.
- Transpirații nocturne.
- Pierdere bruscă în greutate de cauză necunoscută.
- Diaree de mai mult de trei săptămâni de cauză necunoscută.
- Febră de cauză necunoscută.
- Planificarea sarcinii.
- Pregătirea preoperatorie, spitalizare.
- Identificarea urmatoarelor infectii sau combinatii ale acestora: tuberculoza, toxoplasmoza evidenta, infectia cu herpesvirus adesea recurenta, candidoza organelor interne, nevralgia herpes-zoster repetata, cauzata de micoplasme, pneumochisturi sau pneumonie cu legionela.
- Sarcomul lui Kaposi la o vârstă fragedă.
- Sex ocazional.
Interpretarea rezultatelor
Interpretarea rezultatelor testelor conține informații pentru medicul curant și nu reprezintă un diagnostic. Informațiile din această secțiune nu trebuie utilizate pentru auto-diagnosticare sau auto-tratament. Un diagnostic precis este pus de medic, folosind atât rezultatele acestei examinări, cât și informațiile necesare din alte surse: istoric, rezultatele altor examinări etc.
Unitati de masura in Laboratorul Independent INVITRO: test calitativ. Forma de prezentare a rezultatelor: în absența anticorpilor împotriva antigenului HIV 1 și 2 și p24, răspunsul este „negativ”. În cazul depistarii anticorpilor HIV sau antigenului în testul ELISA de screening, proba de ser este trimisă spre analiză prin metoda imunoblot de confirmare la centrul SIDA al orașului, care verifică rezultatele pozitive și nedeterminate.
Rezultat pozitiv:
- infecție cu HIV;
- rezultat fals pozitiv care necesită studii repetate sau suplimentare*);
- studiul nu este informativ la copiii sub 18 luni născuți din mame infectate cu HIV.
*Specificitatea sistemului de testare de screening a anticorpilor HIV 1 și 2 și a antigenului HIV 1 și 2 (HIV Ag/Ab Combo, Abbott) este estimată de producătorul reactivilor la aproximativ 99,6% atât în populația generală, cât și în grup. pacienți cu potențiale interferențe (infectii HBV, HCV, Rubeola, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E.coli, Chl.trach. etc., patologii autoimune (inclusiv artrita reumatoida, prezenta anticorpilor antinucleari), sarcina , niveluri crescute de IgG, IgM, gammapatie monoclonală, hemodializă, transfuzii multiple de sânge).