Тест на вич 4 го поколения сроки. Расшифровка результатов анализа на вич, спид недавно обновлено! Анализ ИФА на ВИЧ: сроки проверки

В большинстве стран мира тестирование населения на ВИЧ построено на выявлении антител к вирусу. Существует большое количество методов обнаружить эти антитела, но иммуноферментный анализ (ИФА) является самым часто применяемым. В особенностях разных поколений ИФА-тестов разбирался Николай Недзельский, главный редактор портала AIDS.ru.


Любой человек, который пытается выяснить есть ли у него/нее ВИЧ, получает однозначный ответ как от национальных, так и зарубежных источников - для этого необходимо пройти тестирование на наличие антител к вирусу. Но как только человек начинает более подробно погружаться в информацию о тестировании, то начинает в ней путаться, так как разные специалисты начинают ссылаться на различные источники, противоречить другу-другу. Это приводит к ощущению, что специалисты сами мало что понимают в диагностике ВИЧ-инфекции. Как вы догадываетесь, на самом деле это не так.За почти три десятка лет диагностики ВИЧ-инфекции, благодаря разработке и введению новых технологий, был достигнут большой прогресс. За эти годы было создано четыре поколения тест-систем, которые сменяли друг друга. Прогресс в диагностике позволил при каждом поколении упростить процесс тестирования, автоматизировать его, тем самым минимализировав "человеческий фактор", а также увеличить достоверность результата на более ранних сроках. К сожалению, национальные рекомендации по тестирования, а так же знания общепрофильных врачей и специалистов кабинетов забора крови зачастую отстают от прогресса, и основываются на устаревших данных. Именно это и является основной причиной неразберихи во мнениях медицинских работников, которые они высказывают во время обследования пациентов, или в своих публикациях.В этом материале, я попытаюсь систематизировать все данные о тестировании методом ИФА, чтобы каждый мог для себя расставить все точки над "i". В некоторых стран, к примеру, России и Великобритании, на национальном уровне обеспечивается широкомасштабный доступ к тестированию населения при использовании тест-систем четвертого поколения, и в этих странах лишь в частых учреждениях, и то очень редко, при обследовании на ВИЧ, можно столкнуться с тест-системами более раннего поколения. Но во многих странах мира по сей день широко используются тест-системы третьего поколения, к примеру, в США, хотя с каждым годом ситуация меняется и все чаще этот вид тест-систем уходит в историю. Хочется обратить внимание, что при изучении различных источников, мне не удалось найти сведений, в которых были бы сведения об использование в наши времена тест-систем первого и второго поколения. Независимо от этого я решил рассказать вам обо всех этих тест-системах как о современных, так и о тех, что уже стали историей.

Тесты, которые стали историей

Тест-системы первого, второго и третьего поколений определяют только наличие антител к ВИЧ. Большинство этих тестов работают методом иммуноферментного анализа (ИФА). Учитывая, что тестирование методом ИФА определяет не сам вирус, а антитела к нему, такой подход называют "косвенным тестированием". Многие страны уже отказались от использования тест-систем, которые определяют только наличие антитела и перешли на тест-системы четвертого поколения [смотрите ниже, - Прим. AIDS.ru], которые также основаны на ИФА, но при этом, помимо антител, могут определять наличие антигена p24.В 1985 году, буквально через пару лет после того как был открыт вирус иммунодефицита человека, были разработаны первые тест-системы ИФА. Для выявления антител они используют лизированный или обработанный ультразвуком вирус, поэтому они называются лизатными. Благодаря этим тест-системам впервые стала возможна диагностика ВИЧ-инфекции, что стало важнейшей вехой в истории борьбы со СПИДом. Особенность тест-систем первого поколения заключались в не высокой

чувствительности и специфичности , а также позволяли определить лишь наличие антител только к ВИЧ1.Второе поколение тест-систем способны определять антитела как к ВИЧ1, так и к ВИЧ2, так как являются рекомбинантными и/или пептидными. В первом случае используются полученные генно-инженерным способом белки-аналоги определенных белковых антигенов вируса, во втором случае используются химически синтезированные фрагменты белков. Это поколение тестов стало доступно в конце 80-х годов прошлого века.Тест-системы третьего поколения обладает высокой чувствительностью, так как в ее основе лежит принцип специфического взаимодействия между антигеном и соответствующим ему антителом. Особенность этих видов тестов - способность определять антитела IgM и IgG, что существенно сократило "периода окна".

"Период окна" этих разновидностей тест-систем

Различные исследователи дают достаточно разные данные о продолжительности "периода окна", то есть о сроках, когда тест-систем третьего поколения способна выявить наличие в крови после момента передачи вируса:
    • От трех (21 дней) до шести недель (42 дней) [Исследование - State of the art for diagnosis of HIV infection. Автор - Branson BM, 2007. Опубликовано - Clin Infect Dis 45:S221-225].
    • От двух до восьми недель (в среднем 25 дней), при чем у 97% людей вырабатываются антитела в течение трех месяцев [Нет сведений о исследовании].
    • Через 20-25 дней [Исследование - Clinical laboratory diagnosis of HIV-1 and use of viral RNA to monitor infection. Автор - Coombs RW, 2008. Опубликовано - In Holmes KK (editor), Sexually Transmitted Diseases. New York: McGraw-Hill].
    • Через 22 дня [Исследование - Diagnosis of Human Immunodeficiency Virus infection. Автор - Maldarelli F, 2004. Опубликовано - In Mandell, Douglas and Bennett"s Principles and Practice of Infectious Diseases (sixth edition). Philadelphia: Elsevier Churchill Livingstone].
    • Через один месяц [Исследование - Towards error-free HIV diagnosis: guidelines on laboratory practice. Автор - Parry JV и др., 2003. Опубликовано - Comm Dis Pub Health 6:334-350].
Считается, что ИФА-тесты второго поколения могут выявить ВИЧ после 42 дней, а тест-системы первого поколения после 63 дней [Исследование - Diagnosis of Human Immunodeficiency Virus infection. Автор - Maldarelli F, 2004. Опубликовано - In Mandell, Douglas and Bennett"s Principles and Practice of Infectious Diseases (sixth edition). Philadelphia: Elsevier Churchill Livingstone]. Тесты-системы третьего поколения, в 16 исследованиях показали, что они все, кроме одной были чувствительны на 100% [Исследование - Improvement in the performance of HIV screening kits. Автор - Perry KR и др., 2008. Опубликовано - Transfus Med 18:228-240]. Другими словами, среди всех обследуемых были выявлены все случаи ВИЧ-инфекции. В одном исследование тест-системой не был выявлен один случай ВИЧ-инфекции (из 533 тестов). Тест не смог определить ВИЧ1 подтипа О, который очень редко встречается на европейском континенте. В этом исследовании чувствительность тест-системы была определена в 99,8%.Во всех 16 исследованиях специфичность тест-систем была от 99,8% и выше. Иными словами, если было бы обследовано 1000 человек, у которых нет ВИЧ-инфекции, то 998 тест показал бы правильный результат и лишь в двух случаях результат был бы ложноположительный. При этом хотим отметить, что этим двум людям не был бы поставлен неверный диагноз "ВИЧ-инфекция", так как в практике все положительные результаты перепроверяются подтверждающим тестом, что позволяет выявить все ложноположительные результаты.

Современные тесты (тест-системы четвертого поколения)

Тест-системы четвертого поколения начали использовать в конце 1990-х годов. Эти тест-системы также основаны на методе ИФА, и фактически это те же тест-системы третьего поколения, но только они имеют одну особенность - способность определять антиген p24. Эти тест-системы часто называют комбинированными тестами, и в их названии всегда указывается "Ag/Ab", что означает способность теста определять как антиген, так и антитела. Также некоторые тест-системы четвертого поколения способны обнаружить ВИЧ-2, и редкие штаммы ВИЧ-1, такие как подтип О.Определение антигена p24 позволяет определить наличие ВИЧ еще до выработки антител, что уменьшает "период окна" и дает возможность выявить вирус в острой стадии ВИЧ-инфекции. При этом при положительном результате не все тесты показывают, что именно выявлено - антитела или антиген, поэтому, хотя тест-системы способны выявить ВИЧ на начальной стадии, определить, как давно передался вирус с их помощью невозможно.Как правило, для тест-систем четвертого поколения в качестве обследуемого материала используется кровь, хотя в некоторых видах тестов возможно использование слюны. Хотя в США иногда используется слюна в качестве материала, такой подход в тестировании не является официально рекомендованным в обследовании населения [Исследование - Alternative Algorithms for Human Immunodeficiency Virus Infection Diagnosis Using Tests That Are Licensed in the United States. Автор - Owen SM и др., 2008. Опубликовано - J Clin Microbiol 46:1588-1595].Как любые тест-системы, тест-система четвертого поколения при получении положительного результата должна быть перепроверена один или два раза.

"Период окна" этой разновидности тест-систем

Выявление антигена позволяет сократить "период окна" примерно на пять дней, по сравнению с тест-системами третьего поколения. Различные научные учреждения дают несколько разные оценки продолжительности "периода окна" между проникновением вируса в организм и способностью тест-систем четвертого поколения это определить:
    • От 11 до 16 дней [Исследование - Clinical laboratory diagnosis of HIV-1 and use of viral RNA to monitor infection. Автор - Coombs RW, 2008 год. Опубликовано - Sexually Transmitted Diseases. New York: McGraw-Hill].
    • Через 14 дней [Исследование - Evaluation of the sensitivity and specificity of six HIV combined p24 antigen and antibody assays. Автор - Ly TD и др., 2004 год. Опубликовано - J Virol Methods 122:185-94].
    • Через 16 дней [Исследование - Diagnosis of Human Immunodeficiency Virus infection. Автор - Maldarelli F, 2004 год. Опубликовано - In Mandell, Douglas and Bennett"s Principles and Practice of Infectious Diseases (sixth edition). Philadelphia: Elsevier Churchill Livingstone].
    • Около двух с половиной недель [Исследование - State of the art for diagnosis of HIV infection. Автор - Branson BM, 2007. Опубликовано - Clin Infect Dis 45:S221-225].
    • Через три-четыре недели после передачи вируса [Исследование - Towards error-free HIV diagnosis: guidelines on laboratory practice. Автор - Parry JV и др., 2003. Опубликовано - Comm Dis Pub Health 6:334-350].
    • Между 24 и 26 днями после передачи вируса [Исследование - Depistage de l"infection par le VIH en France: Modalites de realisation des tests de depistage, argumentaire. Автор - Haute Autorite de sante, 2008. Опубликовано - www.has-sante.fr].
    • Через один месяц [Исследование - UK National Guidelines for HIV Testing. Автор - BHIVA and BIS, 2008. Опубликовано - Available online at www.bhiva.org].
Исследование тест-систем показало, что они способны определить наличие ВИЧ-инфекции, когда передача вируса произошла недавно. Все тест-системы четвертого поколения показали более короткие сроки, по сравнению с тестами третьего поколения. Принимая во внимание, что тест-системы третьего поколения способны определить наличие ВИЧ-инфекции в среднем через 9,8 дней после того как ПЦР определил наличие РНК к ВИЧ, то некоторые тест-системы смогли выявить ВИЧ-инфекцию несколькими днями ранее.Например, исследование в Великобритании показало, что Abbott AXSYM HIV Ag/Ab Combo определил наличие ВИЧ-инфекции спустя 4,2 дня после определения РНК к ВИЧ, а Genscreen Ultra HIV Ag/Ab через 5,3 дня [Исследование - Improvement in the performance of HIV screening kits. Автор - Perry KR и др., 2008. Опубликовано - Transfus Med 18:228-240]. Французское исследование показало, что три тест-системы смогли определить наличие ВИЧ-инфекции менее чем через три дня после обнаружения РНК к ВИЧ (Vidas HIV Duo Quick, Vidas HIV Duo Ultra, Architect HIV Combo), семь тест-систем определили ВИЧ-инфекцию от трех до пяти дней после обнаружения РНК к ВИЧ, а еще две тест-системы показали аналогичные показатели, что и тест-системы третьего поколения (Enzygnost HIV Integral, Vironostika HIV Uniform II) [Исследование - Could the new HIV combined p24 antigen and antibody assays replace p24 antigen specific assays? Автор - Ly TD и др., 2007. Опубликовано - J Virol Methods 143:86-94].

Ложные результаты

Ложноотрицательные результат обычно возможен только тогда, когда тестирование проводится вскоре после передачи вируса, и иногда, когда тест недостаточно чувствительный к редким разновидностям ВИЧ. Исследования, которые проводили производители тест-систем, говорят, что существует мизерная вероятность ложноположительных результатов. Это никак не связано с теми, кто проходит тестирование, а зависит от тех медикаментов, которые они принимают и прививок, которые им делали. [Исследование - Diagnosis of Human Immunodeficiency Virus infection. Автор - Maldarelli F, 2004. Опубликовано - In Mandell, Douglas and Bennett"s Principles and Practice of Infectious Diseases (sixth edition). Philadelphia: Elsevier Churchill Livingstone].Особенность тест-системы четвертого поколения заключается в том, что в очень редких случаях тест может показать ложноотрицательный результат. Это связано с уровнем антигена p24, который начинает снижаться примерно через месяц после передачи вируса, а антитела, как правило, обнаруживается именно в это период времени. В очень редких случаях антиген p24 может быть не выявлен до момента, когда антитела будут выработаны в необходимом для обнаружения количестве. Самостоятельные тесты на антиген p24 более чувствительны, чем комбинированные тесты, поэтому с большей вероятностью они способны обнаружить ВИЧ-инфекцию в этот период времени [Исследование - Combination assay detecting both Human Immunodeficiency Virus (HIV) p24 antigen and anti-HIV antibodies opens a second diagnostic window. Автор - Speers D и др., 2005. Опубликовано - J Clin Microbiol 43:5397-5399; Исследование - Could the new HIV combined p24 antigen and antibody assays replace p24 antigen specific assays? Автор - Ly TD и др., 2007. Опубликовано - J Virol Methods 143:86-94; Исследование - Evaluation of the sensitivity and specificity of six HIV combined p24 antigen and antibody assays. Автор - Ly TD и др., 2004. Опубликовано - J Virol Methods 122:185-94].

Точность тест-систем этой категории

Исследование десяти тест-систем четвертого поколения, проведенных в Великобритании, показало, что они все, кроме одной, были чувствительны на 100%. Другими словами, среди всех обследуемых, были выявлены все случаи ВИЧ-инфекции. В одном исследование тест-системой (Abbott Murex HIV Ag/Ab combination) не был выявлен один случай ВИЧ-инфекции (из 508 тестов). Тест не смог определить ВИЧ2. В этом исследовании чувствительность тест-системы была определена в 99,8%. Все исследуемые в Великобритании тест-систем показали специфичность от 99,7% и выше. Иными словами, если было бы обследовано 1000 человек, у которых нет ВИЧ-инфекции, то 997 тест показал бы правильный результат и лишь в трех случаях результат был бы ложноположительный. То что данный результат ложный было определено подтверждающим тестом. [Исследование - Improvement in the performance of HIV screening kits. Автор - Perry KR и др., 2008. Опубликовано - Transfus Med 18:228-240].Французское исследование двенадцати тест-систем показало, что девять тест-систем имело чувствительность в 100%, а две тест-системы не смогли выявить ВИЧ в одном образце (из 669 тестов), и было признаны с чувствительностью в 99,8%. Тест-системы Vidas Duo и Enzygnost HIV Integral не смогли определить ВИЧ1, подтип F и C. Во Франции сравнили специфичность тест-систем четвертого поколения, используемые в конце прошлого века и выпускаемые сейчас. Если ранее выпускаемые тесты показали специфичность от 99,4% до 99,6%, то тесты, которые используются сейчас, показали специфичность от 99,8% до 100%. [Исследование - Could the new HIV combined p24 antigen and antibody assays replace p24 antigen specific assays? Автор - Ly TD и др., 2007. Опубликовано - J Virol Methods 143:86-94].По оценке ВОЗ, пять тест-систем показали, что каждая из них имеет 100% чувствительность, но оценка специфичности была разной. Тест-система Genscreen Plus HIV Ag/Ab показала - 98.3% специфичность, Vironostika HIV Uni-Form II Ag/Ab - 99.0%, Abbott Murex HIV Ag/Ab Combination - 99.3%, Genedia HIV Ag-Ab - 99.7%, Enzygnost HIV Integral II оказалась специфична на 100% [Исследование - HIV assays: Operational Characteristics, report 15. Автор - World Health Organization Department of Essential Health Technologies, 2004. Опубликовано - WHO].

Портал AIDS.ru

Инфекция, вызванная вирусом иммунодефицита человека, – серьезный диагноз. Ошибки при диагностике могут привести к плачевным последствиям. Анализ ИФА на ВИЧ – наиболее доступный метод исследования, но не во всех случаях он информативен.

ИФА – иммуноферментный анализ. Задача метода ИФА – выявление антител к вирусу иммунодефицита в биологическом материале. С помощью метода можно отследить присутствие в жидкости не самих вирусов, но только антител, вырабатывающихся в ответ на их присутствие. Иммуноферментный анализ широко используется при диагностике ЗППП. Он помогает выявить , передающиеся половым путем.

Существует несколько видов ИФА: прямой вариант, косвенный вариант, метод «сэндвича». В любом случае методика основана на определении наличия антител, которые служат индикатором проникновения чужеродного агента. Чтобы выявить эти «метки», биологический компонент обрабатывают ферментами.

Иммуноферментный анализ определяет антитела с точностью 96 – 98%, погрешность незначительна. Она составляет 2 – 4%.

ИФА – метод диагностики ВИЧ

ИФА анализ на ВИЧ – это первый этап диагностики. Антигенами вируса иммунодефицита являются протеины p24, p15, p17, p31 и гликопротеины gp 41, gp55, gp66, gp120, gp160.

Чтобы обнаружить вирусный белок, берут порцию крови из вены. Образец, направленный на исследование крови ИФА, обрабатывают иммуноферментными реагентами. Из крови выделяют сыворотку. Если в ходе исследования обнаруживаются , значит, в крови уже присутствует вирус.

Кровь сдают строго натощак. За 2 дня до анализа не рекомендуется есть жирную пищу и употреблять алкоголь. Следует за 14 дней прекратить прием противовирусных препаратов.

Преимущества метода:

  • сравнительно небольшая стоимость;
  • высокая стабильность реагентов;
  • высокая чувствительность;
  • короткий срок проведения;
  • минимальное влияние человеческого фактора.

Современные тест-системы для ИФА производят по мировым стандартам. Это повышает точность метода.

Иммуноферментный анализ не всегда дает достоверные результаты. После попадания вируса в кровь начинается латентная (скрытая) стадия развития. Период, пока вирусы не начали размножаться, и антитела еще не сформированы, называется «время серонегативного окна». Делать ИФА на этом этапе бессмысленно. Если заражение произошло, результат будет . Как быстро вирус себя обнаружит, зависит от того, какое количество опасных клеток попало в организм. При незащищенном половом акте или переливании зараженной крови этот срок будет минимальным.

Для высокой достоверности ИФА на ВИЧ исследование проводят трижды. Сроки сдачи ИФА на вирус иммунодефицита человека:

  • через 6 недель после вероятного контакта,
  • через 3 месяца,
  • спустя полгода.

ИФА 4 поколения на ВИЧ – метод, наиболее информативный на ранних сроках заражения. Его можно проводить уже через 1 месяц после предполагаемого инфицирования. Тест на является дорогостоящим по сравнению с аналогом 3-го поколения. Поэтому в государственных медучреждениях он используется как дополнительный метод диагностики. Бесплатно проводится тест 3. Если по его итогам однозначного ответа дать нельзя, пациента направляют на ИФА 4 поколения.

Важно! Сразу после инфицирования человек становится заразным. Он опасен для окружающих, даже когда еще не знает о своем диагнозе!

Если при ИФА выявлены антитела к антигенам ВИЧ, необходимо проводить дополнительные исследования. К таким относится . Достоверность этого метода – 80%. С помощью ПЦР исследуют кровь, сперму и влагалищные выделения. Биологическую жидкость расщепляют в медицинском реакторе, затем подвергают обработке ферментами. В итоге получают данные о том, какова концентрация клеток ВИЧ в жидкой среде. Из-за большой погрешности (20%) при положительном результате дополнительно проводят иммунный блоттинг.

Следующий этап диагностики – тест Комбо (или иммунный блоттинг). Это высокочувствительное исследование (98% достоверности), которое проводят, если через 6 месяцев результаты ИФА неоднозначны.

Расшифровка результатов ИФА

Время расшифровки составляет от 24 до 48 часов. Если необходимо получить информацию срочно (требуется хирургическое вмешательство), расшифровку проводят за 2 часа. В провинциальных медицинских пунктах не всегда есть необходимые реагенты. Пробу берут по месту обращения, затем ее передают в областной центр. При таких обстоятельствах итог можно узнать через 1- 2 недели.

Результат иммуноферментного анализа может быть либо положительным, либо отрицательным; других вариантов нет.

Даже если при первичном и повторных ИФА итог был положительным, пациента нельзя признать ВИЧ-инфицированным. Возможна погрешность. Причины ложноположительного результата:

  • хронические заболевания;
  • длительные инфекционные заболевания;
  • беременность.

Поэтому результат анализа должен быть уточнен дополнительными исследованиями.

Если при проведении иммуноблоттинга на ВИЧ (реактивный), человек считается ВИЧ-инфицированным, а значит, что он здоров.

Клетки вируса со временем адаптируются к назначенным препаратам. Чтобы контролировать , тест ИФА периодически повторяют.

Иногда иммуноблоттинг показывает ложноотрицательный результат. Крайне редко вирус иммунодефицита 6 месяцев (и более) . Это возможно, если в кровь попало незначительное количество клеток вируса. В 0,5% от общего числа случаев диагностировать заражение удается лишь через год. В 99,5% в течение полугода после инфицирования при проведении ИФА получится достоверный результат.

Даже при проведении высокоточных исследований остается вероятность ошибки, составляющая 2%. Не следует забывать о человеческом факторе. Чтобы исключить вероятность ошибки, тест можно провести в 2-х разных учреждениях.

Исследование образцов крови при помощи ИФА на ВИЧ-инфекцию - это один из самых ранних и достоверных методов диагностики. Иммуноферментный тест состоит в числе немногих исследований наряду с ПЦР, которые с большой степенью вероятности подтверждают либо опровергают такой страшный диагноз, как ВИЧ-инфекция или СПИД. С момента выявления первых случаев заражения вирусом иммунодефицита на территории советского пространства, а это 1983 год. Лекарство, которое полностью бы исцеляло эту инфекцию, а также вакцина к ней, не были изобретены, но этот процесс находится в стадии активной разработки. А пока что, только ранняя диагностика ВИЧ-инфекции позволяет держать патологический процесс под контролем.

Информационный экскурс о ВИЧ-инфекции

Вирус иммунодефицита у человека относится к ретровирусам, которые обусловливают медленное течение заболевания. Проникая в организм, вирус иммунодефицита воздействует в первую очередь на лимфоидную ткань. Здоровый иммунитет вырабатывает Т-лимфоциты для того, чтобы распознать вновь прибывшего вирусного агента. После чего дать информацию антителам, по каким признакам узнать вирус иммунодефицита и уничтожить его. Процесс «опознания» вируса иммунодефицита происходит при помощи белков-рецепторов CD4. Но именно на этом этапе наблюдается нечто странное, то, что вот уже много лет не позволяет победить чуму XX века.

Клетка иммунитета СD4 для распознавания чужеродного агента вступает в контакт с вирусом иммунодефицита. В этот момент вирус иммунодефицита прикрепляется к мембране лимфоцита, сливается с оболочкой рецептора и внедряет в клетку иммунитета капсулу со своей генетической информацией и специфическими вирусными белками. И клетка, отправленная на вычисление вируса иммунодефицита, с этих пор сама становится зараженной. Но происходит все, к сожалению, не с одной клеткой, а в очень крупных масштабах. Иммунная система человека в ответ уже на «бывшие свои», а ныне зараженные клетки, создает новые антитела. Но вирусы иммунодефицита, по описанной ранее схеме, снова и снова производят захват клеток-защитников.

Таким образом, иммунитет человека попадает в замкнутый круг. Помочь организму можно только, если проводить высокоактивную антиретровирусную инфекцию (ВААРТ). А также перейти на полностью здоровый образ жизни и питания, что освободит большие ресурсы иммунитета от лишней работы. Ученые всего мира объединили свои усилия и постоянно проводят исследования в поисках эффективного лекарства против ВИЧ-инфекции.

Не так давно был произведен эксперимент с белком ССR5, который обеспечивает врожденную невосприимчивость организма определенной части людей к заражению ВИЧ-инфекцией. Ученые подвергли кровяную субстанцию людей добровольцев генной терапии, чтобы внедрить ССR5 в клетки Т-хелперов. У всех подопечных это привело к масштабному снижению числа ретровирусных ДНК. А у одного пациента вирус иммунодефицита этот метод позволил ликвидировать полностью. На основании данного эксперимента можно пока еще только предположить в единичном случае об успешной победе над страшной чумой XX века.

Начиная с 2016 года, эта деятельность продвинулась значительно вперед. Получены ошеломляющие по эффективности результаты девяносто процентного уничтожения вируса иммунодефицита при помощи атакующих антител, выделяемых мышечной тканью в обход захваченному иммунитету. Для этого в мышечную ткань подопытных живых существ вживляли специальный ген, продуцирующий эти самые клетки-киллеры для уничтожения ВИЧ-инфекции. Но на людях этот метод пока еще не применялся, хотя планируется в ближайшие годы.

Тем более не имеет смысл падать духом. А лучше как можно раньше выявить вирус иммунодефицита, что можно сделать при помощи ИФА, если имел место риск заражения. И в случае подтверждения диагноза, поддерживать свой иммунитет посредством ВААРТ до тех пор, пока новое лекарство от ВИЧ-инфекции будет обнародовано.

Диагностика ВИЧ-инфекции

Метод ИФА на ВИЧ-инфекцию нацелен на обнаружение в образце крови человека антител к вирусу иммунодефицита. Попадая в организм, ретровирусы к группе которых относится ВИЧ-инфекция, не сразу начинают активный захват иммунных клеток СD4 (Т-лимфоцитов). Но дожидаться, пока агрессивные агенты начнут смертельную деятельность в организме не стоит. Не секрет, что при любом заболевании, и ВИЧ-инфекция не является исключением, чем раньше начата терапия, тем эффективнее исцеление.

Когда дело касается вируса иммунодефицита человека, случаи полного исцеления официально зафиксированы не были. Но это совсем не значит, что нужно опустить руки, и пустить заболевание на самотек. С ВИЧ-инфекцией люди живут до 75–80 лет при условии выявления на начальной стадии и постоянной поддерживающей терапии.

Метод иммуноферментной диагностики ВИЧ-инфекции имеет высокую достоверность около 97–99%. Но именно эта незначительная часть в 1–3% может давать ложноположительный либо ложноотрицательный результат диагностики ВИЧ-инфекции при помощи ИФА. Для этих целей, чтобы окончательно подтвердить или опровергнуть показания иммуноферментного анализа, применяется анализ, именуемый иммуноблот (ИБ).

Что представляют собой методы ИФА и ИБ на ВИЧ-инфекцию

Иммунноферментный метод на ВИЧ-инфекцию 4-го поколения направлен не только на поиск и идентификацию патогенных клеток, но и на установления их численности. Следовательно, один иммуноферментный тест объединяет в себе качественное и количественное исследование. Метод ИФА 4-го поколения на ВИЧ-инфекцию на сроке от шести недель с момента предположительного заражения покажет 100% высокую достоверность результатов.

В основании иммуноферментного исследования лежит взаимодействие специфических антител и родственных им антигенов. Благодаря специальному ферменту, и происходит образование совокупности «антиген-антитело». Чтобы осуществить эту реакцию по обнаружению иммуноглобулинов к ВИЧ-инфекции, в полистероловую панель с 96-ю лунками, в которых в твердой форме находятся рекомбинантные белки (сорбированные), помещают образец крови. Оказавшиеся в емкости с сывороткой крови антигены либо антитела распознают известный им объект и образуют с ним соединение «АТ-АГ». Для установления антител к вирусам иммунодефицита 1 и 2 типов применяется также тест ДС ИФФ на ВИЧ АГ-АТ.

Преимущества иммуноферментного метода на ВИЧ-инфекцию 4-го поколения:

  • Высокая достоверность, более 96%. Ложные результаты чаще являются причиной не самого анализа, а неправильной подготовки или недавно перенесенного респираторного заболевания.
  • Определение как наличия, так и численности иммуноглобулинов.
  • Возможность отслеживать результат при проведении терапии ВИЧ-инфекции.
  • Скорость получения результатов анализа на ВИЧ-инфекцию, которая составляет несколько часов, если проводится в диагностическом центре.
  • Анализ на ВИЧ-инфекцию четыре, иммуноферментная реактивность которого значительно выше предшественников, информативен в период серологического окна вируса иммуннодефицита.

Иммунный блотинг является скринингом и назначается для определения типа антигена. Скрининговое исследование ИБ используют как верифицирующий тест при ВИЧ-инфекции через 5–7 недель после проведения ИФА. Метод ИБ основан на применении электрофореза для разделения антигенов вирусов иммунодефицита. Процесс разделения антигенов дает возможность обнаруживать специфические иммуноглобулины к каждому конкретному антигену ВИЧ-инфекции.

Иммунноблотинг применяют, когда иммуноферментный тест ВИЧ-инфекции два раза подряд показывает ложноположительный или ложноотрицательный результат. Подозрения могут возникнуть при отсутствии или наоборот наличии характерных симптомов ВИЧ-инфекции. Хотя здесь тоже могут возникать различные вариации.

Расшифровка результатов ИФА на инфекцию ВИЧ-инфекцию

В случае, когда ИФА плюс подтверждается скринингом ИБ положительным, сомнений не возникает, у пациента в организме присутствует вирус иммунодефицита. Но если, к примеру, ИФФ на ВИЧ положительный, а иммуноблот отрицательный, то делают вывод об инфицировании «минус», то есть о его отсутствии.

Только в такой ситуации пациента все равно отправляют на дополнительное обследование, чтобы исключить наверняка вирус иммунодефицита.

А при иммуноферментном анализе на ВИЧ 4 поколения «минус», а иммуноблоттинге положительном, возможно в организме присутствует иная инфекция. Возможно у человека какое-либо аутоиммунное заболевание, онкологический процесс, бывает псориаз кожи или суставов дает ложноположительные результаты как ИФА, так и ИБ.

Еще такой вариант, когда иммуноферментный тест на ВИЧ-инфекцию показывает результат «минус» и иммунноблот также со значением «минус», здесь остается только порадоваться по причине отсутствия вируса иммунодифицита. Но при наличии специфических признаков, присущих ВИЧ-инфекции или, если человек состоит в тесном контакте с ВИЧ положительным пациентом. Тогда будет тоже необходимо провести дополнительную диагностику, например полимеразную цепную реакцию (ПЦР). К тому же при сомнительных показателях «минус» или «плюс», пациенту рекомендуется пересдать кровь через 4, а лучше 6 месяцев.

Норма и отклонение числа Т-лимфоцитов при ВИЧ-инфекции:

  • Норма Т-клеток от 1000 до 2900 мкл.
  • СПИД ранний от 500 до 200 мкл.
  • СПИД поздний менее 200 мкл.

Болезнь легче предотвратить, чем лечить ― это все известная мудрость. Со времен распространения в обществе свободных нравов появилось и большое количество различных венерических заболеваний. ВИЧ-инфекции и СПИД причисляются пока к неизлечимым заболеваниям. Способ передачи в основном половым путем и через кровь. На все сто процентов защититься ни от одной болезни невозможно. Существует масса непредвиденных ситуаций, даже у людей, ведущих нравственный и чистоплотный образ жизни. В ситуации повышенной опасности заражения ВИЧ и другими опасными инфекциями неоценимую пользу оказывает диагностика крови.

Вконтакте

У большинства больных антитела к ВИЧ выявляются через 6–12 недель после заражения с использованием тест-систем первых поколений и через 3–4 недели с использованием тест-систем третьего поколения, работающих по принципу сэндвич-ИФА с двумя антигенами. Однако ВИЧ-инфекция выявляется уже спустя 2 недели после заражения путем анализа на антиген p24 и уже через 1 неделю - путем анализа на вирусную РНК. Другими словами, период окна можно сократить до 2 недель и более с помощью комплексного диагностического подхода. Капсидный антиген p24 появляется в крови при бурной репликации вируса в острой лихорадочной фазе ВИЧ-инфекции и в этот период легко обнаруживается с помощью простого и сравнительно дешевого ИФА.

Если стоит задача выявить всех ВИЧ-инфицированных, в том числе лиц с ранними стадиями инфекции, то необходимо использовать весь арсенал анализов: на антитела, на антигены и на РНК. Однако тестирование на вирусную РНК дорого стоит, требует больших трудозатрат и недоступно для большинства лабораторий. И все же те лаборатории, в которых есть оборудование для ИФА, способны выявлять большинство случаев ВИЧ-инфекции при условии тестирования проб как на антитела к ВИЧ, так и на антиген p24.

В конце 1990-х гг. появились тест-системы для параллельного ИФА на антитела к ВИЧ и антиген p24, снявшие необходимость проведения раздельных анализов. Разработано и внедряется новое поколение комбинированных тест-систем для одновременного выявления антител к ВИЧ и антигенов ВИЧ.

Преимущество комбинированных анализов заключается в том, что они занимают меньше времени, требуют меньших трудозатрат и экономически более выгодны, чем раздельные анализы. Комбинированные тест-системы обладают высокой аналитической чувствительностью как за счет применения сэндвич-ИФА с двумя антигенами для выявления антител к ВИЧ, так и за счет одновременного выявления антигена p24.

В настоящее время на рынке имеется 8 комбинированных тест-систем четвертого поколения, прошедших клинические испытания: VIDAS HIV DUO Ultra (bioMérieux; Марси-л’Этуаль, Франция); Enzymun-Test-HIV-Combi (Boehringer; Мангейм, Германия); Vironostika HIV Uni-Form II Ag/AB (Organon Teknika; Бокстел, Нидерланды); AxSYM-HIV Ag/AB (Abbott Laboratories; Эбботт-Парк, Иллинойс, США); Enzygnost HIV Integral (Dade Behring; Марбург, Германия); Genescreen Plus HIV Ag-AB (Bio-Rad), and COBAS Core HIV Combi (Roche Diagnostics; Мангейм, Германия); Elecsys-HIV Combi (Boehringer; Мангейм, Германия). В последней тест-системе применен электрохемилюминесцентный сэндвич-метод с двумя антигенами; анализ занимает 18 минут; специфичность по данным испытаний на госпитализированных больных составляет 99,8%. Эта тест-система позволяет диагностировать ВИЧ-инфекцию на 5 дней раньше, чем самые чувствительные тест-системы на антитела к ВИЧ. Существует еще одна комбинированная тест-система без торговой марки для ИФА на антитела и антиген p24 с чувствительностью всего 99,5% и специфичностью 94,8%.

Комбинированный анализ на антитела и антиген для выявления недавней и длительно существующей ВИЧ-инфекции оправдан не только при тестировании доноров крови, но и во многих клинических ситуациях. Ранний диагноз ВИЧ-инфекции путем выявления антигена p24 позволяет безотлагательно начать лечение, провести консультирование больного и принять меры для снижения риска передачи инфекции. Благодаря способности выявлять антиген p24 тест-системы четвертого поколения позволяют диагностировать ВИЧ-инфекцию на ранних стадиях. Эти тест-системы весьма полезны для диагностики недавней и длительно существующей ВИЧ-инфекции в больничных и независимых клинических лабораториях и диагностических центрах (как бюджетных, так и коммерческих). В подобные учреждения нередко обращаются пациенты, риск ВИЧ-инфекции у которых значительно выше, чем у доноров крови. Для раннего выявления ВИЧ-инфекции у таких пациентов требуются тест-системы с высокой аналитической чувствительностью.

Важно отметить, что высокая аналитическая и эпидемиологическая чувствительность большинства тест-систем четвертого поколения, доказанная в испытаниях на больных из разных популяций, больных с сероконверсией и больных с разными подтипами ВИЧ, делает эти тест-системы незаменимыми для диагноза как недавней, так и длительно существующей ВИЧ-инфекции в самых разных ситуациях. Так, например, в клинических лабораториях бюджетных учреждений здравоохранения тестирование крови на антигены ВИЧ обычно не проводится (это прерогатива станций переливания крови), и поэтому при стандартном тестировании на антитела к ВИЧ случаи недавней инфекции могут быть пропущены. Было показано, что выявление инфекции на ранних стадиях дает основание вовремя начать антиретровирусную терапию, что повышает ее эффективность. Кроме того, появляется возможность своевременно проконсультировать пациента, правильно организовать его ведение и предотвратить передачу ВИЧ-инфекции.

Экспресс-тесты: Это класс тест-систем, дающих результат быстрее, чем через 30 минут. Экспресс-тесты для выявления специфических антител к ВИЧ появились в конце 1980-х гг., а в начале 1990-х гг. приобрели популярность. Благодаря усовершенствованию технологии производства экспресс-тесты стали не менее точными, чем ИФА (при условии, что анализ проводится аккуратно, квалифицированным сотрудником). Однако из-за мнимой простоты экспресс-тестов персонал часто допускает ошибки. Например, при внесении реагентов пипетки не всегда держат вертикально (как указано в инструкции), что нарушает соотношение объемов реагентов. Еще один источник ошибок - стремление многих лаборантов одновременно провести анализ нескольких проб. Из-за этого не выдерживается время этапов анализа.

При правильном выполнении экспресс-тесты на антитела к ВИЧ дают надежные результаты и могут использоваться в самых разных медицинских учреждениях и клинических ситуациях. В частности, их применяют в приемных отделениях, кабинетах врачей, амбулаториях, патологоанатомических отделениях, моргах, пунктах переливания крови, а также везде, где требуется срочное тестирование на ВИЧ (например, после контакта медицинского работника с возможным источником инфекции).

Экспресс-тесты на ВИЧ незаменимы для тестирования рожениц, за которыми не проводилось дородовое наблюдение (т. е. рожениц с невыясненным ВИЧ-статусом). Показано, что антиретровирусная терапия (в частности, зидовудином) эффективно снижает риск вертикальной передачи ВИЧ и что такое лечение в максимально ранние сроки необходимо матери, а затем и новорожденному. Экспресс-тестирование беременной на ВИЧ в предродовом периоде позволяет в случае выявления антител начать лечение до родов.

Описание

Подготовка

Показания

Интерпретация результатов

Описание

Метод определения Иммуноферментный анализ (ИФА).

Исследуемый материал Сыворотка крови

Доступен выезд на дом

Комбинированное выявление антител к ВИЧ типов 1 и 2 и антигена р24 ВИЧ, качественный тест.


Внимание. При положительных и сомнительных реакциях, срок выдачи результата может быть увеличен до 10-ти рабочих дней. ВИЧ (вирус иммунодефицита человека), вызывающий СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита) - принадлежит к семейству ретровирусов. Передается от человека к человеку при использовании загрязненных игл и шприцев для внутривенного введения наркотиков или терапевтических процедур, при сексуальных контактах, как гетеро, так и гомосексуальных. Передача вируса может произойти при переливании инфицированной крови и ее продуктов, донорстве органов или семенной жидкости, у медицинских работников - при ранении инфицированными иглами или инструментами. Заражение ВИЧ возможно путем его передачи от инфицированной матери ребенку (вертикальный путь), хотя современные методы профилактики с применением антиретровирусной терапии, при выполнении всех рекомендаций, позволяют снизить такой риск до минимума.

Процесс взаимодействия вируса с клеткой включает ряд стадий: связывание вируса с клеткой, освобождение его от оболочки, проникновение в цитоплазму, синтез ДНК по вирусной РНК, встраивание вирусной ДНК в геном клетки-хозяина. После этого начинается латентная стадия инфекции. В таком состоянии провирусная ДНК может существовать некоторое время, не проявляя активности и не влияя на жизнедеятельность клетки-хозяина. Пока нет экспрессии вирусных белков, нет и иммунного ответа на вирус. Антитела к ВИЧ, характеризующие иммунный ответ организма, появляются после активации вирусной ДНК и начала активного размножения вируса. Длительность латентного периода зависит от ряда факторов, включая и индивидуальные генетические особенности организма.

Антитела к ВИЧ могут появиться, начиная со второй недели после инфицирования; их содержание увеличивается в течение 2-4-х недель и сохраняется на протяжении многих лет. У 90-95% инфицированных они появляются в первые три месяца после заражения, у 5-9% - в период от трех до шести месяцев, у 0,5-1% – в более поздние сроки.

В первые недели инфекции, еще до появления антител к вирусу (т.е. до сероконверсии), в образцах сыворотки или плазмы можно выявить присутствие антигенов ВИЧ, в том числе его капсидного белка р24. Позже, после сероконверсии, он обычно становится недетектируемым.

Комбинированные тест-системы 4-го поколения, к которым относится тест HIV Ag/Ab Combo (Architect, Abbott), выявляют как антитела к ВИЧ 1 и 2 типов, так и антиген р24 ВИЧ, что позволяет проводить раннее обнаружение инфекции. К особым характеристикам применяемого в лаборатории ИНВИТРО скринингового теста для выявления ВИЧ-инфекции стоит отнести высокую специфичность исследования (> 99,5%); 100% чувствительность анализа к антителам, характерным для периода сероконверсии, и чувствительность теста к антигену р24 порядка 18 пг/мл.

Порядок проведения лабораторного обследования на ВИЧ строго регламентирован приказами МЗ РФ и включает в себя этап скринингового (отборочного) исследования наличия антител к ВИЧ иммуноферментными (ИФА) методами, разрешенными к использованию, и этап верификационного (подтверждающего) более развернутого исследования в лаборатории городского центра СПИД. Следует отметить, что даже лучшие скрининговые ИФА-системы не гарантируют 100% специфичности, то есть существует некоторая вероятность получения неспецифических, ложноположительных результатов, связанных с особенностями сыворотки крови пациента. Поэтому положительный результат скринингового ИФА обследования может не подтвердиться в подтверждающих тестах, после чего пациенту выдадут отрицательный или неопределенный результат. При неопределенном результате подтверждающего исследования тестирование следует повторить в динамике через 2-3 недели.

Лабораторная диагностика ВИЧ инфекции у детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, имеет свои особенности. В их крови до 18-ти месяцев с момента рождения могут циркулировать материнские антитела к ВИЧ (класса IgG). Отсутствие антител к ВИЧ у новорожденных не означает, что вирус не проник через плацентарный барьер. Дети ВИЧ-инфицированных матерей подлежат лабораторно-диагностическому обследованию в течение 36-ти месяцев после рождения.

Подготовка

Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи. С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться . Целесообразно проводить исследование на обнаружение антигена и антител к ВИЧ не раньше, чем через две недели после возможного инфицирования, с повторением его через три и шесть недель в случае отрицательного результата. Оформление заявок для проведения исследований в ООО «ИНВИТРО» осуществляется по паспорту или документу, его заменяющему (миграционная карта, временная регистрация по месту жительства, удостоверение военнослужащего, справка из паспортного стола при утере паспорта, регистрационная карта учёта из гостиницы). Предъявленный документ в обязательном порядке должен содержать информацию о временной или постоянной регистрации на территории РФ и фотографию. При отсутствии паспорта (документа его заменяющего) пациент вправе оформить анонимную заявку для сдачи биоматериала. При анонимном обследовании, заявке и полученному от клиента образцу биоматериала присваивается номер, известный только пациенту, и медперсоналу, оформлявшему заказ. ! Результаты исследований, выполненных анонимно, не могут быть представлены для госпитализации, профессиональных осмотров и не подлежат регистрации в ОРУИБ.

Показания к назначению

  • Увеличение лимфатических узлов более двух областей.
  • Лейкопения с лимфопенией.
  • Ночная потливость.
  • Резкое похудание неясной причины.
  • Диарея более трех недель неясной причины.
  • Лихорадка неясной причины.
  • Планирование беременности.
  • Предоперационная подготовка, госпитализация.
  • Выявление следующих инфекций или их сочетаний: туберкулез, манифестный токсоплазмоз, часто рецидивирующая герпесвирусная инфекция, кандидоз внутренних органов, повторные невралгии герпес-zoster, вызванная микоплазмами, пневмоцистой или легионеллами пневмония.
  • Саркома Капоши в молодом возрасте.
  • Случайные половые контакты.

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения в Независимой лаборатории ИНВИТРО: тест качественный. Форма представления результатов: при отсутствии антител к ВИЧ 1 и 2 и антигена р24 выдается ответ «отрицательно». В случае обнаружения антител к ВИЧ или антигена в скрининговом иммуноферментном тесте пробу сыворотки отправляют для исследования подтверждающим методом иммуноблота в городской центр СПИД, который верифицирует положительные и неопределенные результаты.

Положительный результат:

  1. ВИЧ - инфекция;
  2. ложноположительный результат, требующий повторных или дополнительных исследований*);
  3. исследование неинформативно у детей до 18 мес, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей.

*Специфичность скрининговой тест-системы Антитела к ВИЧ 1 и 2 и антиген ВИЧ 1 и 2 (HIV Ag/Ab Combo, Abbott), по оценкам, представленным производителем реагентов, составляет около 99,6% как в общей популяции, так и в группе пациентов с потенциальными интерференциями (инфекции HBV,HCV, Rubella, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E.coli, Chl.trach. и др., аутоиммунные патологии (включая ревматоидный артрит, присутствие антинуклеарных антител), беременность, повышенный уровень IgG, IgM, моноклональные гаммапатии, гемодиализ, множественные гемотрансфузии).